Mokslininkai naudoja srauto citometriją, norėdami atskirti skirtingų tipų ląsteles ar mikroskopinius organizmus. Tai įrankis, naudojamas daugelyje programų, pavyzdžiui, medicininėje diagnostikoje ar teismo patologijoje. Nors šią eksperimentinę techniką atlikti yra gana lengva, atliekamų sudėtingų duomenų analizė srauto citometru yra sunkiau dėl daugelio eksperimentinių veiksnių ir (arba) citometro parametrus. Todėl įprasta, kad citometriniai duomenys yra vizualizuojami ir analizuojami naudojant sudėtingas profesionalias programas, tokias kaip CELLQuest ar FlowJo. Norint suprasti jų gautus rezultatus, būtina susipažinti su srauto citometrijos metodais, mašinomis ir programine įranga eksperimentai.
Patikslinkite eksperimento tikslą klausdami: "Koks buvo tiriamas klausimas ar hipotezė?" Tai bus reikalingi, kad pirminiai rezultatai atitiktų tinkamą formatą ir nustatymus tolesnei analizei, naudojant statistinę citometriją programinė įranga. Atlikite visus būtinus pakeitimus, kad duomenys būtų rodomi su atitinkamais nustatymais (pvz., Teigiamos ląstelės, neigiami vartai, fluorescencijos intensyvumas, ląstelių populiacijos ir kt.).
Raskite vartus. Ląstelės gali būti sugrupuotos arba tiesiog stebimos grupėmis pagal tankio diagramą arba kontūrų diagramą. Grupės dažnai skiriasi, priklausomai nuo jų tapatybės. Jei viena grupė labai intensyviai nudažo tam tikrą žymeklį ar antikūną, daroma išvada, kad visi tos grupės nariai turi specifinį ląstelių tipą, kuris išreiškia tą žymeklį. Įprasta rasti ląstelių, kurios yra teigiamos daugiau nei vienam iš šių žymenų, ir šios ląstelės paprastai yra tarpinės ir žymimos kaip „dvigubai teigiamos“.
Pažvelkite į sklaidos grafikus. Ląstelių grupių išsisklaidymo sklaidos schemoje būdas rodo ląstelių dydį. Ląstelės su labai didelėmis ar didelėmis sklaidomis paprastai yra didelės ląstelės; tačiau jie gali būti dideli vien dėl to, kad juose yra didelė citoplazmos dalis, arba jie gali būti aukšti, nes turi labai didelį branduolį. Priklausomai nuo tiriamos biologijos, tai, žinoma, skirsis labai skirtinguose eksperimentuose.
Pažvelkite į skaičius. Sureguliuokite diagramas, kad vienoje ašyje (paprastai X ašyje) būtų rodomi skirtingi parametrai, išlaikant Y ašies skaičių. Tai rodo teigiamą tam tikro parametro imties populiacijos dalį, kaip a smailė paprastai bus pastebėta teigiamai dažytame mėginyje, kurio nebus neigiamoje kontrolėje pavyzdys.
Pažvelkite į kelių parametrų histogramas. Koreguojant X ašį ir Y ašį, kiekviena nurodo skirtingą parametrą tirtas eksperimento metu, galima giliau suprasti savybes imties. Pvz., Nustatant X ašį į raudoną fluorescenciją, o Y ašį - į žalią fluorescenciją, kvadrantinio stiliaus vartus galima apskaičiuoti mėginys, parodantis keturis kvadrato regionus, kuriuose yra ląstelių ir dažytų raudonos arba žalios fluorescencijos, abiejų spalvų arba visi. Tai leidžia heterogeninį mėginį suskirstyti į sudedamąsias dalis ir vizualizuoti bei kiekybiškai įvertinti visus sutampančius objektus.
Literatūra
- „Srauto citometrijos duomenų analizė“; Susan Sharrow; 1991
- „Srauto citometrija: prietaisai ir duomenų analizė“; Marvinas Van Dila; 1985
- „Srauto citometrijos protokolai“; Teresa ir Robertas Hawley; 2004
apie autorių
Palmeris Owyoungas turi tarptautinio verslo magistro laipsnį Kalifornijos universitete San Diege ir a Kalifornijos universitete, Santa Barbaroje, įgijęs sociologijos menų bakalaurą ir yra apmokytas molekulė biologas. Nuo 2006 m. Jis yra laisvai samdomas rašytojas. Be rašymo, jis yra visą laiką dirbantis „Forex“ prekybininkas ir interneto rinkodaros specialistas.
Nuotraukų kreditai
Polka Dot RF / Polka Dot / Getty Images