Buferiniai tirpalai atsparūs pH pokyčiams, nes juose yra silpnų rūgščių ir šarmų konjugatų, neutralizuojančių H + ir OH- jonus. Buferiniai tirpalai susideda iš silpnų rūgščių ar bazių ir tos rūgšties ar bazės druskos. Tinkamos buferinės sistemos pasirinkimas priklauso nuo buferio pH diapazono. Dauguma biologinių reakcijų vyksta esant pH diapazonui nuo 6 iki 8. Fosfatų buferių buferis, esant pH diapazonui nuo 6,5 iki 7,5. Karboksirūgšties buferiai yra naudingi nuo 3 iki 6. Borato buferiai veikia nuo pH 8,5 iki 10. Amino rūgšties buferiai, tokie kaip glicinas ir histidinas, veikia esant įvairiems pH intervalams. Tris buferis yra viena iš dažniausiai naudojamų buferinių sistemų biologijos laboratorijose. Tris buferinio tirpalo skaičiavimai bus naudojami šiame pavyzdyje, tačiau metodika taikoma bet kuriam buferiniam tirpalui.
Norint nustatyti reikalingus bazės molius, naudokite galutinio tirpalo molingumo ir tūrio sandaugą. Pavyzdžiui, jei reikia 2 litrų 0,1 M Tris buferio tirpalo, reikalingas Tris molių skaičius:
Apskaičiuokite reikalingo buferio masę, padaugindami reikalingų apgamų skaičių iš bazės molekulinės masės. Pvz., 0,2 molio Tris bazės masė lygi:
Ištirpinkite pagrindą distiliuotame vandenyje, naudodami magnetinę maišymo juostą ir maišydami kaitinimo plokštelę. Ištirpinkite jį vandens kiekyje tik šiek tiek mažiau nei galutinis tirpalo tūris (950–975 ml už kiekvieną litrą galutinio tirpalo). Tris buferio pH kinta priklausomai nuo koncentracijos ir jį reikia sureguliuoti, jei naudojamas per mažas pradinis tūris. Taip pat geriausia buferį paruošti toje pačioje temperatūroje, kokia ji bus naudojama atliekant tyrimą ar eksperimentą, nes Tris turi didelius nuo temperatūros priklausomus pH pokyčius.
Patarimai
- Norėdami sutaupyti laiko ruošdami buferinį tirpalą, galite naudoti paruošto buferio koncentratus esant reikalingam pH ir atskiesti norimam molaritumui ir tūriui. Paruoškite buferinį tirpalą toje pačioje temperatūroje, kokia bus naudojama norint išvengti reikšmingų pH pokyčių. Venkite laiko reikalaujančio pH koregavimo, titruokite tik atskiedę iki norimos koncentracijos. Ištirpinus per mažą tūrį, titravimas kartojamas.
Įspėjimai
- Būkite atsargūs dirbdami su rūgštimis ir bazėmis. Dėvėkite apsauginius akinius.
apie autorių
Carla Boulianne yra evoliucijos biologė pagal išsilavinimą ir laisvai samdoma rašytoja. Be to, kad rašė „Demand Studios“ ir „eHow“, ji yra „Suite101.com“ veikėja, kurianti talentingo vaiko auklėjimą. Ji jaudinasi ieškodama naujų temų, atlikdama išsamius tyrimus.
Nuotraukų kreditai
Nuotrauka mandagumo Emmi P. @ morgueFile.com