액체 영양 국물은 대장균과 같은 박테리아를 배양하는 데 사용됩니다. 이 국물의 조리법은 박테리아 종 및 유전 적 변형 (예: 항생제 내성)의 존재 여부에 따라 다릅니다. 국물은 한천을 추가하여 고형화 할 수 있으며, 이는 박테리아가 뚜렷한 콜로니를 형성 할 수 있도록하는 반면, 액체 배양에서는 단순히 부피 전체에 분산됩니다. 이것은 유전자 복제 또는 미생물 분석과 같은 고급 방법을위한 기본적이지만 필수적인 기술입니다. 이 기사에서는 표준 실험실 Escherichia coli 균주를 Luria broth (LB) 한천 플레이트 (또는 페트리 접시)에서 배양한다고 가정합니다.
세균 등급 트립 톤 10g, 효모 추출물 5g, 염화나트륨 5g, 한천 또는 아가 로스 15g, 1N 수산화 나트륨 1 밀리리터를 계량합니다. 1 리터의 배지가 얻어 질 때까지이를 증류수와 오토 클레이브 멸균 수와 혼합합니다. 뚜껑이 헐거워 진 병이나 플라스크에서 미디어를 25 분 동안 오토 클레이브합니다. 항생제 또는 기타 영양 보충제와 같이 고온에서 파괴되는 시약을 추가하기 전에 약 50도까지 식히십시오.
한천을 붓기 전에 용기에 담을 것이므로 오토 클레이브 된 배지를 섭씨 50도에서 섭씨 45도 이상으로 식히십시오. 멸균 페트리 접시를 구하고 접시의 전체 표면적과 깊이의 절반 이상을 덮을만큼 충분히 붓습니다. 접시를 과도하게 채우지 말고 한천이 접시의 상단 가장자리에 닿지 않도록하십시오. 뚜껑을 열고 후드의 모서리에 두어 플레이트가 멸균 환경 (예: 층류 후드 아래)에서 고형화되도록합니다.
접시를 말리십시오. 플레이트를 세팅하자마자 사용할 수 있지만 한천 표면에 약간의 수분이 존재하여 박테리아 콜로니가 충분히 부착되는 것을 방지합니다. 따라서 박테리아를 적용하기 전에 플레이트를 건조시키는 것이 가장 좋습니다. 층류 후드 아래 또는 섭씨 37도에서 며칠 또는 30 분 동안 실온 부란기.
접시를 보관하십시오. 말린 접시는 뚜껑에 거꾸로 쌓아 (반대로) 원래대로 되돌려 놓아야합니다. 포장, 테이프로 닫고 빛으로부터 보호하기 위해 호일로 포장하거나 적절한 컨테이너. 항상 접시에 준비 날짜를 기록하고 접시가 2 개월 이상 된 경우 사용을 피하십시오.
참고 문헌
- "분자 생물학의 현재 프로토콜"; Karen Elbing과 Roger Brent; 2002
팁
- 멸균 된 환경 (예: 모든 단계)에서 가능한 한 많은 위 단계 (바람직하게는 모두)를 수행하십시오. 화염 또는 층류 후드)를 사용하여 공기 중 세균 오염 물질이 미디어.
저자 정보
Palmer Owyoung은 캘리포니아 대학교 샌디에이고에서 국제 비즈니스 석사 학위를 취득했으며 University of California at Santa Barbara에서 사회학 학사 학위를 받았으며 훈련 된 분자입니다. 생물 학자. 그는 2006 년부터 프리랜서 작가로 활동하고 있습니다. 글을 쓰는 것 외에도 그는 정규 Forex 상인이자 인터넷 마케팅 담당자입니다.
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