겔 전기 영동은 DNA를 구성 분자 수준에서 분석 할 수있는 기술입니다. 이 DNA 시각화 방법에서는 샘플을 아가 로스 겔 매체에 놓고 전기장을 겔에 적용합니다. 이로 인해 DNA 조각이 전기 화학적 특성에 따라 다른 속도로 겔을 통해 이동합니다.
에 티듐 브로마이드
이 시각화 기술을 위해 ethidium bromide는 agarose 분말, EDTA 버퍼 및 물과 혼합되어 전기 영동 전에 겔 매트릭스를 형성합니다. 그 결과, 에 티듐 브로마이드 분자는 매트릭스 전체에 균일하게 분산됩니다. 겔의 웰이 각각의 DNA 샘플과 추적 염료로 채워지면 전압이 적용되어 매트릭스 전체에 큰 극성 화합물을 천천히 끌어 당깁니다.
이 이동 중에 DNA 분자의 염기는 ethidium bromide 전하로 인해 입자에 일시적으로 결합하여 입자를 끌어 당깁니다. 겔 전기 영동이 완료 될 때까지 각 DNA 분자는 상당량의 ethidium bromide에서 흡수됩니다.
자외선의 존재 하에서 ethidium bromide는 형광을 나타냅니다. 기술자는 젤 전체에 특수 보정 된 UV 광선을 비추고 기계가 빛나는 조각의 사진을 캡처합니다.
메틸렌 블루
UV transilluminator를 사용할 수 없거나 실용적이지 않은 경우 기술자는 정상적인 조건에서 DNA를 볼 수 있습니다. 완성 된 아가 로즈 겔을 내부에 전기 영동 된 DNA와 함께 메틸렌 블루 용액에 밤새 담가 두었습니다.
상당히 소수성 인 음이온을 가진 염화물 염인 메틸렌 블루 분자는 전체 겔 매트릭스에 침투합니다. 그러나 DNA 전체에 걸친 수소 결합으로 인해 염색 분자가 축적됩니다. 이렇게 증가 된 DNA 얼룩 밀도는 육안으로 볼 수있는 더 깊은 파란색 음영을 생성합니다.
염료 추적
DNA 밴드의 상대적인 크기를 넘어서 기술자는 추적 염료라고하는 화학 물질을 사용하여 각 조각의 절대 크기 (염기 쌍 단위)를 측정 할 수 있습니다. 메틸렌 블루 또는에 티듐 브로마이드를 첨가하지 않고도 볼 수 있으며, 브로 모 페놀 블루 및 자일 렌 시아 놀과 같은 추적 염료는 300 개 뉴클레오티드와 4,000 개 뉴클레오티드로 구성된 DNA 단편과 동일한 속도로 전기 영동하는 동안 아 라고스 겔 매트릭스, 각기. 전기 영동에서 더 많은 양의 DNA 단편이 작은 단편보다 느린 속도로 겔 매트릭스를 가로 질러 이동합니다. 따라서 추적 염료는 DNA 단편의 가시성에 직접적인 영향을 미치지 않지만 DNA 단편의 위치를 비교합니다. 이 염료의 위치에 겔에서 기술자는 DNA 단편의 대략적인 뉴클레오티드 수를 "볼"수 있습니다. 포함합니다.