고성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC)는 화합물을 분리하고 식별하는 데 사용되는 실험실 기술입니다. 화합물을 분리하기 위해 용액에서 서로 다른 극성의 화합물에 의존하는 컬럼 크로마토 그래피 유형입니다. HPLC는 압력을 사용하여 컬럼을 통해 용액을 더 빠르게 통과시켜 더 빠르고 때로는 더 정확한 결과를 생성하기 때문에 표준 컬럼 크로마토 그래피와 다릅니다. 목표는 컬럼에서 화합물을 분리하고 별도로 배출하는 것입니다.
HPLC의 속도와 화합물의 서로 다른 극성에 의존하기 때문에 유사한 구조와 극성은 동시에 또는 거의 동일한 크로마토 그래피 장치에서 나올 수 있습니다. 시각. 이것을 coelution이라고합니다. Coelution은 혼합물의 어느 부분이 어떤 지점에서 용출되었는지 정확히 결정하게합니다.
HPLC는 일반적으로 다른 재료로 만든 비드로 채워진 유리 컬럼을 사용합니다. 컬럼을 통과하는 혼합물에는 비드에 서로 다른 강도로 결합하는 화학 물질이 있습니다. 극성의 유사성에 따라 달라지는 결합 강도는 화학 물질이 방출되기 전에 비드에 결합하는 시간을 결정합니다. 일부 화합물은 너무 강하게 결합하여 본질적으로 컬럼의 비드에서 방출되지 않으며 컬럼에서 나오는 용액에서 측정되지 않습니다.
일반적인 실험실 분리 기술에는 분석 또는 분리 방법을 개발 한 다음 해당 분석을 구현하여 용액에서 개별 화합물을 분리하는 것이 포함됩니다. 그러나 이로 인해 일반적으로 절차를 거쳐야하는 여러 솔루션이 생성되어 복잡성이 기하 급수적으로 증가합니다. HPLC는 종종이 프로세스를 단순화하고 가속화 할 수 있지만 HPLC 장치 개발 비용은 엄청날 수 있습니다. HPLC 장치를 개발하는 것은 훨씬 더 효율적이지만 화합물을 분리하기위한 다른 분석법을 개발하는 것보다 훨씬 더 많은 비용이 듭니다. 이것은 많은 소규모 개인 소유 실험실에서 재정적으로 실행 가능하지 않습니다.
HPLC는 단순한 화합물을 분리하는 데 사용될뿐만 아니라 세포 혼합물에서 특정 단백질을 분리하는데도 사용됩니다. 이 경우 컬럼의 비드는 일반적으로 수집해야하는 단백질에 특이적인 항체로 코팅됩니다. 단백질은 항체와 결합하고 나머지 용액은 컬럼을 통과 한 다음 다른 용액을 사용하여 단백질이 방출되어 수집됩니다. 이를 위해서는 고도로 숙련 된 기술자가 항상 컬럼을 모니터링하고 프로세스가 계획대로 정확하게 실행되고 있는지 확인해야합니다.