고성능 액체 크로마토 그래피는 혼합물의 실험실 분석을위한 기술입니다. 단순히 중력이 아닌 고압을 사용하여 컬럼을 통해 혼합물 샘플을 추진하는 효율적인 유형의 크로마토 그래피입니다. 샘플이 주입 된 다음 높은 압력이 포함 된 펌프가 패킹 된 컬럼을 따라 샘플을 이동시켜 개별 구성 요소로 분리합니다. 이 분리는 결과를 산출하기 위해 검출기에 의해 분석됩니다.
주사 부위
HPLC에 주입하려면 먼저 샘플을 극성 액체 용매에 용해시켜야하며, 바람직하게는 알려진 HPLC 스펙트럼을 사용하여 데이터를 샘플과 구별 할 수 있습니다. 샘플이 포함 된 액체 용액은 기기에 넣고 컬럼으로 보내집니다. 주사 부위의 실제 위치는 기기 브랜드에 따라 다릅니다. 대부분의 경우 주입 과정은 자동화되어 있지만 어떤 경우에는 실험실 작업자가 작은 주사기 바늘을 사용하여 샘플을 주입해야합니다.
펌프 구성품
HPLC 장치의 펌프 구성 요소는 컬럼을 통해 샘플을 추진하는 압력을 제공하기 때문에 필요합니다. 펌프 강도는 다양하지만 강력한 펌프는 최대 6,000psi (평방 인치당 파운드)의 압력을 생성 할 수 있으며, 이는 샘플 주입 후 적용됩니다. 이를 통해 샘플은 중력 만 사용하여 떨어질 때보 다 더 빠르고 효율적으로 컬럼을 통과 할 수 있습니다.
열 설명
펌프에 의해 컬럼을 통과하는 시료의 속도가 빨라지므로 단순한 액체 크로마토 그래피에 사용되는 것과 다른 유형의 컬럼을 사용할 수 있습니다. 컬럼의 패킹 재료는 훨씬 작은 입자 크기를 가질 수 있으며, 이는 표면적을 증가시켜 샘플과 컬럼의 상호 작용을 지원합니다. 대부분의 HPLC 컬럼은 극성을 통해 작동합니다. 샘플은 극성 용매에 용해되고 컬럼은 주로 비극성 탄화수소로 구성됩니다. 샘플 분자의 극성 부분은 주로 상호 작용하기 때문에 컬럼을 매우 빠르게 통과합니다. 용매, 시료의 비극성 성분은 컬럼에 남아있어 컬럼과 약한 상호 작용을 형성합니다. 구성 요소. 따라서 샘플의 구성 요소는 대부분의 극성에서 대부분의 비극성 순서로 컬럼에서 분리됩니다.
감지기 기능
검출기는 또한 사용되는 HPLC 기기의 유형에 따라 다릅니다. 그러나 대부분의 기능은 동일한 기본 방식으로 작동합니다. 분리 된 시료 성분이 컬럼에서 나올 때 자외선 소스가 비 춥니 다. 대부분의 유기 화합물은 일정량의 빛을 흡수하므로 적용된 광선을 통과 할 때 감지기는 흡수 된 빛의 양을 감지 할 수 있습니다. 검출기는 또한 컬럼에서 나오는 순서에 따라 구성 요소의 머무름 시간을 기록합니다. 이 출력은 피크 면적을 기반으로 분석되어 샘플 성분의 정확한 특성을 결정할 수 있습니다.