როგორ წავიკითხოთ გელის ელექტროფორეზი

გელი ელექტროფორეზი არის მეთოდი, რომელიც ლაბორატორიებში გამოიყენება გამოყოფისთვის დნმ (დეზოქსირიბონუკლეინის მჟავა). ის ასევე შეიძლება გამოყენებულ იქნას RNA და ცილების გამოსაყოფად.

გელის ელექტროფორეზის შედეგების წაკითხვა მკვლევარებს საშუალებას აძლევს დაადგინონ ნიმუშის ზოლების ზომა. იმის გასაგებად, თუ როგორ მუშაობს პროცესი, პირველ რიგში უნდა ვისწავლოთ გელის ელექტროფორეზის განმარტება.

გელის ელექტროფორეზი არის მძლავრი ინსტრუმენტი, რომელსაც იყენებენ მოლეკულური ბიოლოგია დნმ, RNA და ცილების ზომისა და ელექტრული მუხტის დასადგენად. თქვენ დაიწყებთ დნმ – ის ნაჭრების გამოყენებას, რომლებიც მონელებულია დნმ – ის უფრო დიდი სტრიქონის ფერმენტებით.

გელის ელექტროფორეზის ზოლის ინტენსივობის გამოყენებით, შეგიძლიათ გაარკვიოთ, რა ზომისაა ფრაგმენტები. ამის შემდეგ შეიძლება ა დნმ თითის ანაბეჭდი.

როგორც სიტყვის "ელექტრო" ნაწილი ცხადყოფს, ა გელის ელექტროფორეზის განმარტება გულისხმობს ელექტრული ველის გამოყენებას. გამოიყენება სპეციალური მანქანა, რომელიც შეიცავს ბუფერულ ხსნარს, რომელიც მოიცავს ელექტროდებს, ლარის შესაჩერებლად ჭაბურღილს და თავად ელექტროდებს.

ლარის ელექტროფორეზი საჭიროა გელის გამოყენება, რომელიც ჩვეულებრივ წარმოიქმნება აგარის გაწმენდილი ვერსიით ფირფიტაზე, რომელსაც აგაროზა ეწოდება.

აგაროზას გელები გააკეთეთ ფოროვანი მატრიცა, რომლის საშუალებითაც სხვადასხვა ზომის დამუხტულ მოლეკულებს შეუძლიათ სხვადასხვა სიჩქარით იმოძრაონ. ქილის ქიმიკატს, რომელსაც ეტიდიუმის ბრომიდი (EtBr) ემატება, გელის ხსნარს უმატებენ ფორმში.

თუ თქვენ ძალიან მცირე დნმ ან ცილის მოლეკულები გაქვთ გამოსაყოფი, შეიძლება დაგჭირდეთ ა პოლიაკრილამიდის გელი აგაროზის ნაცვლად. გაითვალისწინეთ პოლიაქრილამიდის გამოყენებისას, რადგან ეს ნეიროტოქსიკურია.

სპეციალური სავარცხელი მოათავსეს აგაროზას გელის ფორმაში, შემდეგ კი გაამყარეთ ფრთხილად. აქ განთავსებულია დნმ-ის ფრაგმენტი ან სხვა მოლეკულური ნიმუშები, რომლებიც პირველად შერეულია სპეციალური დატვირთვის საღებავთან. იტვირთება საღებავი არის მხოლოდ დნმ-ის მოძრაობის თვალყურისდევნება, ვინაიდან სხვაგვარად არ ჩანს.

ასევე არის ჭა, რომელიც შეიცავს იმას, რასაც ა დნმ-ის კიბე ან მარკერი. ეს ემსახურება როგორც მაღალხარისხოვან შაბლონს, რომელიც ცნობილია ზოლის ზომით, შესასწავლი დნმ ნიმუშებთან შედარებით. ელექტრული ველის გამოყენების შემდეგ, ეს უარყოფითად დამუხტული მოლეკულები გელის გავლით მიემართებიან პოზიტიური დასასრულისკენ.

მას შემდეგ, რაც მოლეკულებმა გელის ბოლომდე გაიარეს, კითხვის დრო დგება გელის ელექტროფორეზის შედეგები. EtBr საღებავი ლარში ადვილად უკავშირდება დნმ-ს, შესაბამისად, მისი გამოყენება და შემდეგ იხილავთ დნმ-ის ფლუორესირებული ჯგუფების ულტრაიისფერი შუქის ქვეშ.

დიდი სიფრთხილე გმართებთ, რომ არ შეეხოთ ეთიდიუმ ბრომიდს, რადგან დნმ-სადმი მისი მიჯაჭვულობა ასევე ნიშნავს, რომ მას შეუძლია განტვირთოს იგი; ამიტომ ითვლება მუტაგენად. ახლა უკვე ხელმისაწვდომია უფრო ახალი, უსაფრთხო საღებავები, თუმცა მათი ფასები უფრო მაღალია.

UV სინათლე ავლენს დნმ-ის ან სხვა მოლეკულური ნიმუშების გელის ელექტროფორეზის ჯგუფის ინტენსივობას. შემსრულებლების მდებარეობა ლარზე აჩვენებს ზომას დნმ ფრაგმენტი. გელის ელექტროფორეზის ჯგუფის ინტენსივობა ავლენს მოლეკულის კონცენტრაციას.

ახლა თქვენ შეგიძლიათ შეადაროთ დნმ – ის ზოლები თქვენს ნიმუშებში დნმ – ის კიბის ნიმუშთან. ცნობილი კიბის ზოლის ზომა დაგეხმარებათ განსაზღვროთ დნმ-ის შედარებითი ზომა, რომელსაც სწავლობთ.

გამოყენებულია ლარის ელექტროფორეზი დნმ თითის ანაბეჭდის და ექსპერტიზის ექსპერტიზა. იგი დაეხმარა მკვლევარებს მრავალი სახეობის გენომების შესახებ ინფორმაციის დადგენაში. მაღალი ხარისხის გელის ელექტროფორეზის შედეგების გამოყენება აუცილებელია ამ მნიშვნელოვანი დარგებისთვის.

ამიტომ გადამწყვეტი მნიშვნელობა აქვს მაღალხარისხიან ინგრედიენტებთან მუშაობას და დიდი ზრუნვას გელი დამზადებისას. აუცილებელია დნმ-ის ნიმუშების RNA ან ცილებით დაბინძურების თავიდან ასაცილებლად.

გამოიყენეთ სუფთა ბუფერული, დაასხით გელი ფრთხილად, რომ მისი სავარცხელი ჭაბურღილები თანაბრად ჩამოყალიბდეს და ყველა რეაგენტი შეინარჩუნოთ სათანადო ტემპერატურაზე. ლარის ელექტროფორეზი ჯგუფის ინტენსივობა უნდა იყოს ძლიერი და სუფთა, ფონზე სხვა დნმ-ის კვალი არ უნდა იყოს, ხოლო რნმ-ის ან ცილების ნაცხი არ აბინძურებს ლარს.