ვირუსის ტიტრის გაანგარიშება რთული მეთოდია იმის თქმისა, რომ მეცნიერი ითვლის ვირუსების რაოდენობას კონკრეტულ ნიმუშში. ვირუსის ტიტრის გამოსათვლელად, მეცნიერები აზიანებენ მზარდი ბაქტერიების ფირფიტებს ვირუსული ხსნარებით სხვადასხვა კონცენტრაციით და გაერკვიეთ ვირუსების რაოდენობა ორიგინალ ხსნარში ვირუსების გამო დაღუპული ბაქტერიების დათვლით ინფექცია
ჩაიცვით ხელთათმანები, შეავსეთ 10 კულტურის მილი 9 მლ ბულიონით და შეაფასეთ ისინი "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3" და ასე რომ, სანამ "10 ^ -10". ეს მილები გამოყენებული იქნება ვირუსის სერიული განზავებისათვის, რომელიც გამოიყენება ფაგის გამოსათვლელად ტიტრული ვინაიდან ვირუსები შეიძლება გაიზარდოს წარმოუდგენლად მაღალ კონცენტრაციებში, საჭიროა მათი განზავება, რათა ეფექტურად დაითვალოთ. თითოეული მილი წარმოადგენს ვირუსის ათჯერ განზავებას.
აიღეთ 1 მლ შერეული კულტურა თქვენი მილიდან, წარწერით „10 ^ -1“ და გადაიტანეთ იგი ახალი პიპეტით შემდეგ მილში, წარწერით „10 ^ -2“. შეურიეთ ეს მილიც.
განაგრძეთ ეს ნიმუში სერიული განზავების სერიის შესაქმნელად. თქვენ დასრულდება 9 მილის 9 მლ და 1 მილი 10 მლ. თქვენს მილებში ვირუსული დატვირთვა განზავდება 10 – ჯერ (თქვენი პირველი მილის) ან 100 – ჯერ (მეორე მილის) ათი მილიარდჯერ (ბოლო მილის).
თქვენს აგარს დაუმატეთ ბაქტერიული კულტურის ორი წვეთი და ნაზად აურიეთ. ეს არის ბაქტერიები, რომლებიც დაიღუპება, რაც საშუალებას მოგცემთ დაითვალოთ ვირუსის ნაწილაკების რაოდენობა კონკრეტულ ხსნარში.
დაამატეთ 1 მლ თითოეული სერიული განზავებით მის შესაბამის აგარის მილს, სანამ მილები ჯერ კიდევ ცხელი წყლის აბაზანაშია. მაგალითად, 1 მლ თქვენი 10 ^ -1 სერიული განზავება უნდა გადავიდეს აგარის მილში, წარწერით "10 ^ -1".
შეურიეთ თითოეული მილი და შემდეგ დაასხით თითოეული მილის პეტრის ფირფიტაში შესაბამისი ეტიკეტით. ამით შეიქმნება აგარის თხელი ფენა, რომელიც თითოეულ ფირფიტაში გაჟღენთილია ბაქტერიებით და ვირუსებით. მიეცით ფირფიტები მთელი ღამის განმავლობაში ინკუბატორში.
ამოიღეთ თქვენი თეფშები ინკუბატორიდან და შეისწავლეთ ისინი. თქვენ უნდა ნახოთ მოღრუბლული ადგილები მთელ ფირფიტაზე, სადაც ბაქტერიები გაიზარდა, გარდა მცირე მკაფიო ლაქებისა, რომლებსაც ფირფიტები ეწოდება. ეს დაფები მკვდარი ბაქტერიების ლაქებია და თითოეული დაფა წარმოადგენს ერთ ვირუსს.
მიიღეთ ფირფიტის ფირფიტების რაოდენობა და გამრავლეთ 10-ზე. 157 დაფა რომ დაითვალოთ, 1570 მიიღებდით.
გაამრავლეთ რიცხვი, რომელიც წინა ეტაპზე მიიღეთ, თქვენი გამხსნელი მილის უკუ რიცხვით. მაგალითად, თუ თქვენ მიერ არჩეული ფირფიტა იყო 10 ^ -5 ფირფიტა, თქვენ 1570-ზე გამრავლდებით 10 ^ 5-ზე და მიიღეთ 157000000. ეს საბოლოო რიცხვი თქვენი ფაგების ტიტრია და წარმოადგენს ვირუსების რაოდენობას თქვენი ორიგინალური კულტურის თითო მლ.
