თხევადი საკვები ბულიონი გამოიყენება ბაქტერიების კულტივირებისთვის, როგორიცაა Escherichia coli. ამ ბულიონის რეცეპტები განსხვავდება ბაქტერიული სახეობების და გენეტიკური მოდიფიკაციების არსებობის მიხედვით, მაგალითად, ანტიბიოტიკებისადმი გამძლეობა. ბულიონი შეიძლება გამყარდეს აგარის დამატებით, რაც საშუალებას აძლევს ბაქტერიებს მკაფიო კოლონიები შექმნან, ხოლო თხევად კულტურაში ისინი უბრალოდ იფანტება მთელ მოცულობაში. ეს არის ძირითადი, მაგრამ აუცილებელი ტექნიკა ისეთი მოწინავე მეთოდებისთვის, როგორიცაა გენების კლონირება ან მიკრობიოლოგიური ანალიზები. ამ სტატიაში ვარაუდობენ, რომ Escherichia coli- ის სტანდარტული შტამების კულტივირება ხდება ლურიას ბულიონის (LB) აგარის ფირფიტებზე (ან პეტრის ჭურჭელზე).
აწონეთ 10 გრამი ბაქტერიული დონის ტრიპტონი, 5 გრამი საფუარის ექსტრაქტი, 5 გრამი ნატრიუმის ქლორიდი, 15 გრამი აგარი ან აგაროზა და 1 მილილიტრი 1N ნატრიუმის ჰიდროქსიდი. შეურიეთ ეს გამოხდილი და ავტოკლავირებული სტერილური წყლის მოცულობით, სანამ მიიღება 1 ლიტრი საშუალო. ავტოკლავი მედიის ფხვიერ სახურავ ბოთლებში ან კოლბებში 25 წუთის განმავლობაში. ნება მიეცით გაგრილება დაახლოებით 50 გრადუს ცელსიუსზე, სანამ დაამატებთ რეაგენტებს, რომლებიც განადგურდებიან მაღალ სიცხეში, მაგალითად ანტიბიოტიკები ან სხვა საკვები დანამატები.
მიეცით ავტოკლავირებული საშუალების გაგრილება 50 გრადუს ცელსიუსამდე და არანაკლებ 45 გრადუსი ცელსიუსით, რადგან აგარი ჩაყრის მის ჭურჭელში, სანამ არ დაასხით. შეიძინეთ სტერილური პეტრის კერძები და დაასხით იმდენი, რომ დაფაროს ფირფიტის მთლიანი ზედაპირი და მისი სიღრმის ნახევარი მაინც. მოერიდეთ ფირფიტების გადავსებას და სასურველია არ მისცეთ აგარს დაუკავშირდეს კერძის ზედა კიდეს. მიეცით ფირფიტების გამკვრივება სტერილურ გარემოში (მაგ. ლამინირებული გამწოვის ქვეშ) სახურავების დატოვებისა და კაპოტის კუთხეში.
მშრალი ფირფიტები. მიუხედავად იმისა, რომ ფირფიტების დაყენებისთანავე გამოყენება შესაძლებელია, აგარის ზედაპირზე გარკვეული ტენიანობა იქნება, რაც ხელს შეუშლის ბაქტერიული კოლონიების საკმარისად მიერთებას. ამიტომ, უმჯობესია ფირფიტები გაშრეს ნებისმიერი ბაქტერიის გამოყენებამდე, მაგალითად, დატოვონ ისინი საჯდომზე ოთახის ტემპერატურა რამდენიმე დღის განმავლობაში ან ნახევარი საათის განმავლობაში ლამინირებული გამწოვის ქვეშ ან 37 გრადუს ცელსიუსში ინკუბატორი.
თეფშები შეინახეთ. გამხმარი ფირფიტები თავსახურით უნდა დაალაგოთ (შებრუნებული) და დააბრუნოთ თავდაპირველს შეფუთვა, ფირზე დახურვა და ან კილიტაში გახვევა სინათლისგან დასაცავად ან შესაბამისში კონტეინერი. ფირფიტებზე ყოველთვის დაწერეთ მომზადების თარიღი და მოერიდეთ გამოყენებას, თუ ფირფიტები 2 თვეზე მეტია.
გამოყენებული ლიტერატურა
- "მიმდინარე პროტოკოლები მოლეკულურ ბიოლოგიაში"; კარენ ელბინგი და როჯერ ბრენტი; 2002
Რჩევები
- ჩასატარეთ რაც შეიძლება ბევრი ზემოთ მოცემული ნაბიჯი (სასურველია ყველა) სტერილურ გარემოში (მაგ ღია ალი, ან ლამინირებული გამწოვი) ჰაერის ბაქტერიული დამაბინძურებლების შეჩერების და ზრდის შეჩერების მიზნით მედია.
ავტორის შესახებ
პალმერ ოუიუნგი ფლობს ხელოვნების მაგისტრის საერთაშორისო ბიზნესში კალიფორნიის უნივერსიტეტიდან სან დიეგოში და ა ხელოვნების ბაკალავრი სოციოლოგიაში სანტა ბარბარეს კალიფორნიის უნივერსიტეტიდან და არის გაწვრთნილი მოლეკულა ბიოლოგი. 2006 წლიდან არის დამოუკიდებელი მწერალი. მწერლობის გარდა, ის არის Forex– ის სრული დროით მოვაჭრე და ინტერნეტ მარკეტინგის სპეციალისტი.
ფოტო კრედიტები
იუპიტერული სურათები / კომსტკი / გეტის სურათები