化学者は、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）を使用して、化合物の混合物を分離します。 一般に、このメソッドは、サンプルをカラムに注入し、そこで1つまたは複数の溶媒と混合することで構成されます。 さまざまな化合物がさまざまな程度でカラムに吸着または「付着」します。 溶媒が化合物をカラムに押し出すと、混合物の成分の1つが最初にカラムから排出されます。 機器は、化合物がカラムを出るときに化合物を検出し、x軸にリテンションタイム、y軸に検出器からのシグナル強度を含むプロットで構成されるクロマトグラムを生成します。 化合物がカラムを出ると、クロマトグラムに「ピーク」が生成されます。 一般に、クロマトグラムのピークが離れていて狭いほど、分離能は高くなります。 科学者は、1.0以上の解像度が適切な分離を表すと考えています。
x軸の値が各ピークの基部にあることに注目して、クロマトグラム内の2つの隣接するピークの幅を測定します。 x軸は保持時間を表し、通常は秒単位で測定されます。 したがって、ピークが15.1秒で始まり、18.5秒で終わる場合、その幅は（18.5〜15.1）= 3.4秒です。
ピークの最大値の位置に対応する時間、つまりx軸上の位置に注目して、リテンションタイムを決定します。 この値は通常、手順1で幅を計算するために使用される2つの値のほぼ中間になります。 たとえば、ステップ1で示した例では、約16.8秒で最大値が示されます。
次の方法で、2つのピーク間の分離能Rを計算します。
R = \ frac {RT_1-RT_2} {0.5（W_1 + W_2）}
ここでRT1 およびRT2 ピーク1と2の保持時間を表し、W1 とW2 それらのベースで取られたピークの幅を表します。 ステップ2と3の例を続けると、1つのピークは16.8秒のリテンションタイムと3.4秒の幅を示します。 2番目のピークが3.6秒の幅で21.4秒のリテンションタイムを示した場合、分解能は次のようになります。
R = \ frac {21.4-16.8} {0.5（3.4 + 3.6）} = 1.3
必要なもの
- HPLCクロマトグラム
- 電卓
