ゲル電気泳動では、DNAまたはタンパク質のサンプルは、通常はサイズに基づいて、電界を印加することによって分離され、ゲル内を移動します。 ゲル電気泳動の使用は生物医学研究室では日常的であり、さまざまな異なる質問に答えるために使用されるため、結果を分析するための普遍的な方法は実際にはありません。
たとえば、ウエスタンブロッティング、ノーザンブロッティング、サザンブロッティングなどのさまざまな手法には、すべて ゲル電気泳動.
あなたがしているなら アガロースゲル 最も一般的な種類の手順であるDNAサンプルの電気泳動では、通常、少なくとも2つのことを行う必要があります。1）ノーカットを区別する インサートからのプラスミド、ニックの入ったプラスミド、カットされたプラスミド、2）検量線Excelまたは 電卓。
ラボノートをチェックして、どのサンプルがどのレーンにロードされたかを確認します。 ゲル用のウェルをロードしたとき、各レーン/サンプルのアイデンティティに注意する必要があります。
定規を使用して、ウェルからトラッキング染料までの画像上の距離を測定します。 どのDNAバンドよりも遠くまで移動しました（つまり、 ゲル）。 この番号を記録します。使用する単位は重要ではありません。
ウェルから「はしご」の各バンドまでの写真の距離を測定し、その距離を 追跡染料 バンド。 この計算により、各バンドの相対的な移動度がわかります。
例：トラッキング色素バンドが6インチ移動し、5、4.5、3.5インチ移動した3つのバンドがあるとします。
それらの相対的な可動性は何ですか？ 回答：5、4.5、および3.5を6で割って、0.833、0.75、および0.5833の相対移動度を取得します。
製造元は、提供するラダー内の各フラグメントのサイズを提供しているため、この情報はすでにあるはずです。
スプレッドシートプログラムのトレンドライン関数を使用して、方程式をデータに適合させます。 この方程式は、べき乗方程式（x ^ -2など）であり、データに比較的よく適合している必要があります（R係数は少なくとも0.9）。 これにより、曲線と標準曲線が作成されます Excel.
小さいDNAフラグメントは、大きいDNAフラグメントよりもゲル内を移動するため、トラッキング色素に最も近いものが最小になることに注意してください。 ただし、 プラスミド （環状）DNAは切断されておらず、電話コードのように「スーパーコイル」またはねじれ、実際に移動します。 さらに遠く 同じサイズの線状DNAより。
同様に、不完全に切断された「ニックの入った」プラスミドは移動します 短い 同じサイズの線形DNAよりも距離。 したがって、ゲルから切断されていないプラスミドのサイズを推定することはできません。
各レーンのバンドをそのレーンにロードしたサンプルのIDと一致させ、表示されているものが期待したものであるかどうかを判断します。 これは、実験の性質によって異なります。
ただし、一般に、インサートプラスミドを2つの制限酵素で消化した場合、インサートはプラスミドから解放されると予想されます。
プラスミドよりもはるかに小さいため、そのレーンに2つのバンドが表示されます。1つは上部近く、もう1つは下部近くにあります。 制限酵素を1つだけ使用して切断したプラスミドは、2つを使用して切断したプラスミドよりも少し遠くまで移動する単一のバンドのみを形成する必要があります。 制限酵素、しかしインサートまではどこにもありません。
ウェルから切断されたプラスミドまでの距離を測定し、定規でバンドを挿入します。 これらの数値をトラッキング色素が移動した距離で割って、インサートとカットプラスミドの相対的な移動度を求めます。