ゲル電気泳動における色素追跡の機能は何ですか？

ゲル電気泳動 は、DNAフィンガープリントやゲノム配列決定など、多くの実用的なアプリケーションで一般的に使用されている実験技術です。 プロセスには分離が含まれます DNA フィルタリングゲルを介して分子の動きの速度を追跡しながら、電流を使用してフラグメント。

無色のDNAサンプルに青またはオレンジのトラッキング色素を追加すると、サンプルを確認し、電気泳動中にDNA分子がどのように移動するかについての情報を取得できます。 同定は、分子の移動後のゲル上のDNAバンドのサイズに基づいています。

ゲル電気泳動 電流を使用してゲルを通してDNAフラグメントを引き出し、サイズと電荷によってDNA分子を分離および識別します。 ゲルはしばしばで作られています アガロースパウダー —から抽出された多糖類 海藻.

アガロースを水と塩の緩衝液に加え、混合物を加熱および冷却して、電気泳動手順中に濾過マトリックスとして機能する多孔質ゲルを作成します。 次に、ゲルを電気泳動ユニットに入れ、導電性の緩衝液で覆います。 電気.

DNAとローディング色素を含む溶液は、ゲルの準備中に作成する必要があるゲルの小さなウェルにピペットで移されます。 染料助けますサンプルをはっきりと見る 電気泳動ユニットの負極の近くにあるゲルウェルに追加していること。

正極は反対側にあります。 DNAフラグメントの既知の標準は、比較と識別の目的でDNAバンドのはしごを作成する最初のウェルに配置されます。

DNA分子のリン酸骨格はDNAに負の電荷を与えます。 反対側が引き付けられるため、電流がオンになると、DNA分子が正極に引き付けられ、移動または「移動」し始めます。

小さいサイズのDNAフラグメントは、ゲルの多孔質マトリックスを通って移動するときに抵抗が少なくなるため、大きいフラグメントよりも速く移動します。 同様のサイズのDNAフラグメントは、ゲル内でDNAのバンドを形成します。

DNAは無色なので、 追跡染料 サンプルにあなたを助けます 動きの速度を決定する 電気泳動中のゲル中の異なるサイズのタンパク質分子の。 DNAサンプルとともに移動する色素のローディングの例には、 ブロモフェノール青 そして キシレンシアノール。

選択した色素は反応性であったり、DNAを変化させたりしてはなりません。 ブロモフェノールブルーは、約400塩基対を含む小さなサイズのDNA鎖を追跡するために使用される色素ですが、キシレンシアノールは、最大8,000塩基対の大きなDNA鎖に適しています。 選択した色素は反応性であったり、DNAを変化させたりしてはなりません。

DNAサンプルを準備するとき 電気泳動、染料をロードするとともに、グリセロールと水を追加する必要があります。 グリセロールは、ゲルシートの一端のウェルに挿入される前に、DNAサンプルの密度を高める重いシロップ状の物質です。

グリセロールがないと、DNAのはしごを形成するのと同じように、ウェル内に沈んで層を形成する代わりに、DNAサンプルが分散します。

ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS PAGE）は、線状DNA分子よりも小さく複雑なタンパク質とアミノ酸を分離するのに適した手法です。 電気泳動にはアガロースゲルの代わりにポリアクリルアミド（SDS PAGEゲル）を使用します。

ブロモフェノールブルー（BPB）は、サンプルバッファーに 追跡染料 それはタンパク質を分離するのと同じ方向に動き、それらの前縁を区別します。

などのDNA結合色素 オレンジ色 臭化エチジウムは、ゲルまたは電気泳動バッファーに加えることができます。 名前が示すように、色素はDNA分子に付着します。

この変異原性色素は皮膚細胞のDNAに結合する可能性があるため、取り扱いには細心の注意を払う必要があります。 トラッキング染料とは異なり、エチジウムブロマイド 蛍光 明るく下 紫外線、DNAバンドを可視化します。