特定のサンプル中の特定のタンパク質を特定するために使用される分析技術であるウエスタンブロットは、酵素または蛍光標識された一次抗体がその特定の抗原に結合する能力を利用します。 これは、ゲル電気泳動から始まり、メンブレンブロッティングと抗体によるプロービングが続く3ステップのプロセスです。 タンパク質の検出は直接的または間接的であり得、後者は一次に対して向けられた標識された二次抗体を使用する。 ルーチンのタンパク質分析技術として受け入れられていますが、ウエスタンブロットには制限と利点があります。
利点：感度
ウエスタンブロットを支持する最大の議論の1つは、その感度です。 サンプル中のわずか0.1ナノグラムのタンパク質を検出する能力があるため、この手法は理論的には次のように機能します。 効果的な早期診断ツールであり、患者のウイルスや細菌からのわずかな免疫原性反応さえも感知します サンプル。 間接的なウエスタンブロットは、イメージングシステムによって検出されたシグナルの強度を増幅する二次抗体の能力から、この感度にさらに基づいています。 感度が高いということは、テストに必要な抗体が少ないことを意味し、ラボのコストを大幅に削減します。
利点：特異性
ウエスタンブロット法は、その特異性を2つの大きな要因に負っています。 まず、ゲル電気泳動により、サンプルがさまざまなサイズ、電荷、およびコンフォメーションのタンパク質に分類されます。 ゲル内に形成されたバンドが目的のタンパク質またはポリペプチドのサイズについての手がかりをすでに与えているため、このプロセス自体は検出に向けた大きなステップです。 抗体-抗原相互作用の特異性は、2番目の大きな要因として機能します。 特定の抗体は特定のタンパク質に対して親和性を示すため、このプロセスでは、300,000種類のタンパク質が混在している場合でも標的タンパク質を選択的に検出できます。
短所：誤った結果または主観的な結果が発生しやすい
その感度と特異性にもかかわらず、ウエスタンブロットは依然として誤った結果を生み出す可能性があります。 抗体が意図しないタンパク質と反応すると偽陽性が発生します。 HIVの検査を受けている患者が結核または多数の寄生虫を持っている場合に発生します 感染症。 一方、偽陰性は、より大きなタンパク質が膜に適切に移動するのに十分な時間が与えられていない場合に簡単に発生する可能性があります。 不適切なブロッティングと処理は、多くの場合、歪んだ、色あせた、または複数のバンドを生成し、技術者の解釈の対象となるテスト結果を作成します。
短所：高コストと技術的需要
ウエスタンブロットの費用は、タグ付き抗体、熟練した分析者、および実験装置に対する多額の個人支出の複合です。 デリケートなプロセスであるウエスタンブロッティングでは、サンプルの成分を適切に識別するために、すべてのステップで精度が必要です。 試薬濃度またはインキュベーション期間のわずかなエラーは、プロセス全体に壊滅的な影響を与える可能性があります。 最後に、検出とイメージングに必要な機器（化学発光、蛍光、放射性、またはレーザー検出システム）は、平均的な微生物学ユニットには高すぎる可能性があります。