細胞の遺伝的青写真は、その遺伝物質、つまりDNA内にコード化されています。 DNAが細胞の核を離れることは決してないので、この情報が細胞質に入り、他の タンパク質と生化学的成分が存在する場合、最初にDNAをメッセンジャーRNA（mRNAまたはポリ）に転写する必要があります （A）RNA）。 このmRNAは、細胞の多くの機能を実行するタンパク質に翻訳されます。 非常にまれなmRNAを検出または定量化したり、マイクロアレイのプローブを作成したり、相補的DNA分子のライブラリーを構築したりするには、mRNAを単離する必要があります。 ただし、トータルRNA（つまり、細胞内のすべてのRNA）の抽出とそれに続くmRNAの単離は、相互に排他的なプロセスではありません。 前者は、mRNAを抽出するために実行する必要があります。
TRIzolホモジナイゼーション：トータルRNAには、すべてのmRNA、トランスファーRNA、リボソームRNA、およびその他の非コードが含まれます RNA。 これらを他の細胞成分から分離するために、細胞は最初にバーストオープンされてその細胞を放出します 内容。 これは、遠心分離（高速回転）によってペレット化された細胞をTRIzol試薬（Life Technologies）に再懸濁することによって行われます。 他のバージョンのTRIzol（AmbionのTRI試薬など）も同様に機能します。
全RNAの分離：一連の遠心分離を使用して、細胞のさまざまな成分（タンパク質、DNA、RNA）を懸濁液内の層または相に分離します。 上部の黄色の相は脂肪で構成されており、廃棄することができます。 目的の相は赤く着色され、トータルRNAを含み、保持されます。 フェノール-クロロホルム抽出とイソプロパノールとエタノールを使用した一連のアルコール洗浄を行った後、RNAをペレット化してmRNAを単離することができます。 この酵素がトータルRNAを分解するのを防ぐためにRNase阻害剤を加えてください。
mRNA抽出：自家製のラボプロトコルでは大量に生成されないため、キットを使用してmRNAを分離するのが一般的です。 高度に精製されたmRNAの。 市販のキットには、InvitrogenのFastTrack 2.0またはAmbionのPoly（A）Pure mRNAIsolationが含まれています キット。 これらの基本的な手順は、このようなキットに共通しています。
d）このサンプルを遠心分離し、上清を回収します。上清は、キットに含まれている一連の結合バッファーおよび低塩バッファーで数回洗浄されます。
参考文献
- "cDNAライブラリプロトコル？"; イアンG。 コーウェルとキャロラインA。 オースティン; 1997
- "体外転写および翻訳プロトコル？"; マーティンJ。 Tymms; 1995
チップ
- 氷に沈めて、すべての試薬、細胞、RNAを冷たく保ちます。 これにより、ホモジナイゼーションプロセス中に放出される他の酵素によってRNAが分解されるのを防ぎます。
警告
- TRIzolなどの試薬は毒性があり、皮膚や粘膜に接触してはなりません。 この試薬を取り扱うときは、常に安全なラボプロトコルを遵守してください。
著者について
Palmer Owyoungは、カリフォルニア大学サンディエゴ校で国際ビジネスの修士号を取得しています。 カリフォルニア大学サンタバーバラ校で社会学の学士号を取得し、分子の訓練を受けています。 生物学者。 彼は2006年からフリーランスのライターを務めています。 執筆に加えて、彼はフルタイムの外国為替トレーダーおよびインターネットマーケターです。
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