DNAはゲル電気泳動を使用してどのように視覚化されますか？

ゲル電気泳動は、DNAをその構成分子のレベルで分析できるようにする技術です。 このDNA可視化法では、サンプルをアガロースゲル培地に置き、電界をゲルにかけます。 これにより、DNAの断片が、電気化学的特性に応じて異なる速度でゲル内を移動します。

この可視化技術では、臭化エチジウムをアガロース粉末、EDTAバッファー、および水と混合して、電気泳動の前にゲルマトリックスを形成します。 その結果、臭化エチジウム分子はマトリックス全体に均一に分散します。 ゲルのウェルがそれぞれのDNAサンプルとトラッキング色素で満たされると、電圧が印加されて、マトリックス全体に大きな極性化合物がゆっくりと引き込まれます。

この動きの間、DNA分子の塩基は、臭化エチジウムの電荷のおかげで一時的に粒子に結合し、粒子を引きずります。 ゲル電気泳動が完了するまでに、各DNA分子はかなりの量の臭化エチジウムを拾い上げています。

紫外線の存在下で、臭化エチジウムは蛍光を発します。 技術者は、特別に調整されたUV光をゲル全体に照射し、機械が光る破片の写真をキャプチャします。

UVトランスイルミネーターが利用できないか実用的でない場合、技術者は通常の状態でDNAを可視化できます 電気泳動したDNAを含む完成したアガロースゲルをメチレンブルーの溶液に一晩浸します。

疎水性の高い陰イオンを含む塩化物塩であるメチレンブルー分子は、ゲルマトリックス全体に浸透します。 ただし、DNA全体の水素結合により、染色分子が蓄積します。 このDNA染色密度の増加により、肉眼で見える濃い青の色合いが得られます。

DNAバンドの相対的なサイズを超えて、技術者はトラッキング色素と呼ばれる化学物質を使用して各フラグメントの絶対サイズ（塩基対）を測定できます。 メチレンブルーや臭化エチジウムを添加しなくても可視で、ブロモフェノールブルーやキシレンシアノールなどの追跡色素が移動します。 300ヌクレオチドと4,000ヌクレオチドからなるDNAフラグメントと同じ速度での電気泳動中のアラゴースゲルマトリックス、 それぞれ。 電気泳動では、より大きなDNAフラグメントが、より小さなフラグメントよりも遅い速度でゲルマトリックスを通過します。 したがって、色素の追跡はDNAフラグメントの可視性に直接影響を与えませんが、DNAフラグメントの位置を比較します。 これらの色素の位置までのゲル内で、技術者はDNAフラグメントのおおよそのヌクレオチド数を「見る」ことができます。 が含まれています。