サンプル中の微生物の濃度を決定する古典的な方法の1つは、サンプルを希釈し、プレート上で微生物を増殖させ、コロニーを数えることです。 播種された微生物は、1つまたは複数の細胞からなるコロニー形成単位から、見たり数えたりできる目に見えるコロニーに成長します。 細菌は、プレートカウントを使用して評価する最も一般的な微生物です。 コロニーカウントは、土壌、水、食品中の微生物を検出してカウントするために使用されます。 コロニーを数えるためのプロトコルは、正確で系統的なアプローチを強調しています。
サンプルの希釈、メッキおよびインキュベーション
寒天プレートに微生物サンプルを塗るだけでは、コロニー形成単位が非常に多いため、個々のコロニーが混ざり合い、数えることができなくなります。 この問題を解決するには、サンプルを液体培地に混合し、その混合物を少量取り、さらに希釈します。 このプロセスを6〜10回繰り返します。 最終希釈液を寒天プレートに広げ、コロニーを数える前に4〜7日間インキュベートします。
手動カウント
コロニーを数える際の主なトリックは、各コロニードットを1回数えることです。 1つのアプローチは、グリッドの背景にペトリ皿を置き、各グリッドセルのコロニーを数え、すべてのセルを整然としたパターンで移動することです。 ペトリ皿の裏に数えられたコロニーをマークすることも有用なアプローチです。 通常、少なくとも3つのプレートを数える必要があります。 堅牢な推論を行うために30〜300のコロニーを含むプレートのみを使用することは、ラボやメーカーにコンサルティングサービスを提供する微生物学ネットワークを示唆しています。 コロニーが多すぎて数えられない、またはコロニーが少なすぎるプレートは、新しい希釈液から再プレートする必要があります。
自動カウント
ヒューマンエラーは、コロニーを手動で数えるのにかかる時間を増やします。 精度と効率の両方を向上させるために、自動コロニーカウントデバイスにペトリ皿を置きます。 自動コロニーカウンターは皿の画像を取得し、コロニーを背景から分離し、アルゴリズムを使用してプレート上のコロニーをカウントします。 2つ以上のコロニーがエッジで接触している場合、アルゴリズムでコロニーを区別するのが困難になる可能性があるため、これは進行中のソフトウェア開発の領域です。
カウントをより複雑にする
コロニー数から微生物密度を計算する精度には、いくつかの制限があります。 コロニー形成単位は、単一の細胞、細胞の鎖、または細胞の塊全体である可能性があります。 コロニーは1つの細胞を表すと想定されているため、コロニー数から計算された濃度は低くなる可能性があります。 異なる微生物は異なる増殖条件を必要とし、プレート上のコロニーは、それらのインキュベーション条件下でその増殖培地上で増殖する微生物のみを表しています。 さらに、コロニーカウントでは死細胞は登録されません。これは、元のサンプルの細胞濃度が必要な場合の重要な考慮事項です。