高速液体クロマトグラフィー（HPLC）は、化合物を分離および同定するために使用される実験技術です。 これは、溶液中の化合物の異なる極性に依存してそれらを分離するカラムクロマトグラフィーの一種です。 HPLCは、圧力を使用して溶液をカラムにすばやく通すため、標準のカラムクロマトグラフィーとは異なり、より迅速に、場合によってはより正確な結果が得られます。 目標は、カラム内の化合物を分離し、それらを別々に排出させることです。
HPLCの速度と化合物の異なる極性に依存しているため、2つの化合物は 同様の構造と極性は、同時にまたはほぼ同じようにクロマトグラフィー装置を出ることができます 時間。 これは共溶出として知られています。 共溶出は、混合物のどの部分がどの時点で溶出したかを正確に決定することを困難にします。
HPLCは通常、さまざまな材料で作られたビーズで満たされたガラスカラムを使用します。 カラムに強制的に通される混合物には、さまざまな強度でビーズに結合する化学物質が含まれています。 極性の類似性に依存する結合の強さは、化学物質が放出される前にビーズに結合する時間を決定します。 一部の化合物は非常に強く結合するため、カラム内のビーズから本質的に放出されることはなく、カラムを出る溶液中で測定されることもありません。
典型的な実験室分離技術は、アッセイまたは分離方法を開発し、次にそのアッセイを実施して個々の化合物を溶液から分離することを含む。 ただし、これは通常、複数のソリューションを実行する必要があり、複雑さが指数関数的に増加します。 多くの場合、HPLCはこのプロセスを簡素化および高速化できますが、HPLC装置の開発コストは莫大なものになる可能性があります。 HPLC装置の開発は、はるかに効率的ですが、化合物を分離するための他のアッセイの開発よりもはるかにコストがかかります。 これは、多くの小さな個人所有の研究所にとって経済的に実行可能ではありません。
HPLCは、単純な化合物を分離するために使用されるだけでなく、細胞混合物から特定のタンパク質を分離するためにも使用されます。 この場合、カラム内のビーズは通常、収集する必要のあるタンパク質に特異的な抗体でコーティングされています。 タンパク質は抗体に結合し、残りの溶液はカラムを通過し、次にタンパク質は別の溶液を使用して放出され、収集されます。 これには、熟練した技術者が常にカラムを監視し、プロセスが計画どおりに実行されていることを確認する必要があります。