HPLCの基本コンポーネント

高速液体クロマトグラフィーは、混合物の実験室分析のための技術です。 これは、単なる重力ではなく高圧を使用して混合物のサンプルをカラムに通す効率的なタイプのクロマトグラフィーです。 サンプルが注入された後、大量の圧力を含むポンプがサンプルを充填カラムに沿って移動させ、そこでサンプルを個々のコンポーネントに分離します。 次に、この分離を検出器で分析して結果を出します。

HPLCに注入するには、サンプルを最初に極性液体溶媒、できれば既知のHPLCスペクトルを持つ溶媒に溶解して、そのデータをサンプルのデータと区別できるようにする必要があります。 サンプルを含む溶液は機器に入れられ、カラムに送られます。 注射部位の実際の場所は、器具のブランドによって異なります。 ほとんどの場合、注入プロセスは自動化されていますが、場合によっては、ラボの作業員が小さな注射針を使用してサンプルを注入する必要があります。

HPLCユニットのポンプコンポーネントは、サンプルをカラムに通す圧力を提供するために必要です。 ポンプの強度はさまざまですが、強力なものは最大6,000 psi、つまり1平方インチあたりのポンドの圧力を生成できます。これはサンプルの注入後に適用されます。 これにより、重力のみを使用してサンプルを滴下する場合よりも、サンプルをより迅速かつ効率的にカラムに通過させることができます。

ポンプによってカラムを通過するサンプルの速度が上がると、単純な液体クロマトグラフィーで使用されるものとは異なるタイプのカラムを使用できるようになります。 カラム内の充填剤は、粒子サイズをはるかに小さくすることができます。これにより、表面積が増加し、サンプルとカラムの相互作用が促進されます。 ほとんどのHPLCカラムは、極性を介して機能します。 サンプルは極性溶媒に溶解され、カラムは主に非極性炭化水素で構成されています。 サンプル分子の極性部分は、主に 一方、サンプルの非極性成分はカラム内に残り、カラムとの弱い相互作用を形成します コンポーネント。 したがって、サンプルの成分は、最も極性の高いものから最も極性の低いものの順にカラムから外れます。

検出器は、使用しているHPLC機器のタイプによっても異なります。 ただし、ほとんどは同じ基本的な方法で機能します。 分離されたサンプル成分がカラムから外れると、紫外線源が照射されます。 ほとんどの有機化合物は一定量の光を吸収するため、適用された光ビームを通過するときに、検出器は吸収された光の量を検出できます。 検出器は、コンポーネントがカラムから外れる順序に基づいて、コンポーネントの保持時間も記録します。 次に、この出力をピーク面積に基づいて分析し、サンプルの成分の正確な性質を判断できます。