כיצד לקרוא אלקטרופורזה ג'ל

ג'ל אלקטרופורזה היא שיטה בה משתמשים במעבדות להפרדה DNA (חומצה דאוקסיריבונוקלאית). ניתן להשתמש בו גם להפרדת RNA וחלבונים.

קריאת תוצאות אלקטרופורזה בג'ל מאפשרת לחוקרים לקבוע את גודל הגדילים במדגם. כדי להבין כיצד התהליך עובד, ראשית יש ללמוד את הגדרת הג'ל אלקטרופורזה.

אלקטרופורזה ג'ל הוא כלי רב עוצמה המשמש ביולוגיה מולקולרית לקביעת הגודל והמטען החשמלי של DNA, RNA וחלבונים. אתה מתחיל באמצעות פיסות DNA שעוכלו על ידי אנזימים מגדיל DNA גדול יותר.

באמצעות עוצמת פס ג'ל אלקטרופורזה כתוצאות שלך, תוכל להבין מה גודל השברים. לאחר מכן ניתן להשיג א טביעת אצבע DNA.

כפי שחושף החלק ה"אלקטרו "של המילה, א הגדרת אלקטרופורזה ג'ל כרוך בשימוש בשדה חשמלי. משתמשים במכונה מיוחדת המכילה תמיסת חיץ המכסה את האלקטרודות, באר להשעיה בג'ל בפנים ואלקטרודות עצמן.

אלקטרופורזה ג'ל מחייב שימוש בג'ל שנוצר ללוח העשוי בדרך כלל מגרסה מטוהרת של אגר מאצות ים הנקראת agarose.

ג'לים אגרוזיים ליצור מטריצה ​​נקבובית שדרכה מולקולות טעונות בגדלים שונים יכולות לנוע במהירות שונה. כימיקל הנקרא אתידיום ברומיד (EtBr) מתווסף לתמיסת הג'ל לפני שפיכתו לתבנית.

אם יש לך מולקולות DNA או חלבון קטנים מאוד להפרדה, ייתכן שיהיה עליך להשתמש ב- ג'ל פוליאקרילאמיד במקום agarose. יש לשים לב כשאתה משתמש בפוליאקרילאמיד, שכן הוא רעיל עצבי.

מסרק מיוחד מונח בתבנית ג'ל agarose, ואז מוסר בזהירות לאחר שהתמצק. זה המקום בו מניחים את קטע ה- DNA או דגימות מולקולריות אחרות, לאחר שעורבבו לראשונה עם צבע העמסה מיוחד. ה צבע העמסה זה רק לעקוב אחר תנועת ה- DNA, מכיוון שאינו נראה אחרת.

יש גם באר המכיל את מה שמכונה a סולם DNA או סמן. זה משמש תבנית איכותית עם גדלי פס ידועים, להשוואת גודל לדגימות ה- DNA הנחקרות. לאחר החלת השדה החשמלי, מולקולות טעונות שליליות אלה יעברו דרך הג'ל לקראת הסוף החיובי.

לאחר שהמולקולות נסעו לקצה הג'ל, הגיע הזמן לקריאה תוצאות ג'ל אלקטרופורזה. צבע EtBr בג'ל נקשר ל- DNA בקלות, ומכאן השימוש בו, ואז אתה יכול לראות להקות של DNA זורחות תחת אור UV.

עליכם לנקוט בזהירות רבה שלא לגעת באתידיום ברומיד, מכיוון שהזיקה שלו ל- DNA פירושה גם שהוא יכול להתיר אותו; לכן הוא נחשב למוטגן. צבעים חדשים ובטוחים יותר זמינים כעת, אם כי נקודות המחיר שלהם גבוהות יותר.

אור ה- UV חושף את עוצמת פס ג'ל אלקטרופורזה של ה- DNA או דגימות מולקולריות אחרות. מיקום הלהקות על ג'ל חושף את גודל הלהקה קטע DNA. ה עוצמת הלהקה אלקטרופורזה ג'ל חושף את ריכוז המולקולה.

עכשיו אתה יכול להשוות את רצועות ה- DNA בדגימות שלך לדגימת ה- DNA. גדלי הלהקה הידועים של הסולם יעזרו לכם לקבוע את הגודל היחסי של ה- DNA אותו אתם לומדים.

נעשה שימוש באלקטרופורזה של ג'ל ב טביעות אצבעות DNA ופלילים. זה עזר לחוקרים לקבוע מידע על הגנום של מינים רבים. שימוש בתוצאות אלקטרופורזה ג'ל איכותיות חיוניות לתחומים חשובים אלה.

לכן חשוב לעבוד עם מרכיבים איכותיים ולהקפיד מאוד על הכנת ג'לים. זה חיוני כדי למנוע זיהום של דגימות DNA עם RNA או חלבונים.

הקפידו להשתמש במאגר נקי, שפכו את הג'ל בזהירות כך שבארות המסרק שלו נוצרו באופן שווה ושמרו את כל הריאגנטים בטמפרטורה הנכונה. אלקטרופורזה ג'ל עוצמת הלהקה צריכה להיות תוססת ונקייה, ללא עקבות של DNA אחר ברקע, וללא מריחות של RNA או חלבונים שמזהמים את הג'ל.