מהו ספירה במיקרוביולוגיה?

מיקרוביולוגיה היא המחקר של מיקרואורגניזמים: צורות חיים חד תאיות מיקרוסקופיות או כמעט בלתי נראות כמו חיידקים, ארכאיים, פרוטוזואנים וכמה פטריות, ואפילו כמה צמחים רב תאיים קטנים במיוחד, בעלי חיים ו פטריות. מיקרוביולוגים חוקרים גם תופעות שאינן אורגניזם בחיים כמו וירוסים, פריונים, נגיף וירוסים. "מיקרוב" הוא מונח תופס לכל הישויות הללו. ספירה במיקרוביולוגיה היא קביעת מספר החיידקים הקיימים בודדים במדגם; ארבע טכניקות בסיסיות אפשריות.

מדד ישיר אחד לספירת חיידקים הוא ספירת הלוחות הסטנדרטית, הנקראת גם ספירה בת קיימא. לספירה זו תרבית מדגם על ידי דילולו, הנחתו על גבי צלחות של מדיום תרבית, ודגירתן למשך זמן מוגדר. לאחר מכן אתה סופר את מספר המושבות ומשתמש במספר זה כדי להסיק את מספר החיידקים המקורי במדגם. מבחינה טכנית, ספירת צלחות אינה נותנת את מספר החיידקים הבודדים, אלא "יצירת מושבות" יחידות, "כי אתה לא יכול לדעת בוודאות אם כל מושבה אכן באה מחיידק אחד או מקבוצה זעירה של חיידקים. עם זאת, ספירות אלה נחשבות מדויקות מאוד להערכת מספר החיידקים בדגימות מקוריות. חסרונות הם שבדיקה זו גוזלת זמן ומצריכה ציוד מיוחד שיש להכין כראוי.

ספירות מיקרוסקופיות ישירות, הנקראות גם ספירת תאים כוללת, הן צורה אחרת של ספירה ישירה. ראשית מחלקים דגימה למספר תאים בגודל שווה. ואז אתה קובע את המספר הממוצע של חיידקים לכל תא על ידי ספירת חלקם או כולם תחת מיקרוסקופ. לבסוף אתה משתמש בממוצע זה כדי לחשב את המספר ביחידה המקורית. החיסרון העיקרי בספירות מיקרוסקופיות ישירות הוא שקשה להבדיל בין חיידקים חיים לבין מתים, כך ששיטה זו עשויה שלא לתת ספירה בת קיימא מדויקת.

מבחני עכירות הם צורות של ספירה עקיפה. עכירות היא עכירות של נוזל. במדידה טורבידימטרית שמים דגימה בתמיסה, מודדים את עננות הפתרון החדש על ידי אור בו בעזרת ספקטרופוטומטר, ואז העריך את מספר החיידקים החיים שיידרש כדי לייצר את רמת העננות הנצפית. החיסרון כאן הוא שמישהו בוודאי כבר עשה מספר רב של ספירות צלחות סטנדרטיות של החיידק המדובר כדי להכין פתרונות לדוגמא בעלי עכירות משתנה, כך שיהיה לך תקן למדוד את המדגם הנוכחי שלך נגד. עליכם להיזהר גם מריכוז יתר של הדגימה מכיוון שספירת טורבידי-מדידה מדויקת רק אם אין חיידקים בדגימה החוסמים אף אחד אחר. בהשוואת עכירות חזותית אתה משווה את עכירות המדגם שלך עם עכירות של יחידה באותו גודל ומספר חיידקים ידוע, ומעריך ספירה על סמך השוואה זו.

שתי צורות אחרות של ספירה עקיפה הן קביעת המונים ומדידת פעילות מיקרוביאלית. לספירת קביעת המונים, אתה שוקל את כמות החומר הביולוגי במדגם שלך, השווה זאת משקל לעקומה סטנדרטית לספירות חיידקים ידועות ולהעריך את המספר החיידקי המקורי השוואה. לצורך מדידת פעילות מיקרוביאלית אתה מודד את כמות המוצר הביולוגי במדגם שלך, כגון פסולת מטבולית, ואז השווה זאת לעקומה סטנדרטית לספירות ידועות והעריך את ספירתך מכך השוואה.