מה זה שיבוט ת"א?

שיבוט ת"א הוא שיטה פשוטה ונוחה לשביט מוצרים של תגובת שרשרת פולימראז (PCR). "TA" הוא קיצור של "תימין" ו"אדין ". טכניקת שיבוט זו מנצלת את יכולתו של תימין להכלאה לאדנין בנוכחות ליגזות. לא משתמשים באנזימי הגבלה, בניגוד לשיטת המשבוט המסורתית. במקום זאת, מוצרי PCR מוגברים באמצעות אנזימי פולימרזות של טאק.

שיטת השיבוט TA משתמשת בפעילות טרנספרז טרמינלית של מעבר מסוים של חומצה deoxyribonucleic לכל קצה של מוצר ה- PCR.

נעשה שימוש בווקטור שיבוט לינארי עם תלויים ראשוניים מסוג T-3 (3'-T) הנקראים וקטור T המשמש לשיבוט מוצר PCR זה לווקטור פלסמיד. מוצר ה- PCR מעורבב עם וקטור זה בשיעור גבוה.

לתערובת מתווסף ליגאז DNA (ליגז T4), המאפשר לשני הכלים ולהצטרף.

שיבוט ת"א הוא שיטה נוחה לשכפול משנה של מוצרי PCR בווקטור לינארית, וזה הרבה יותר פשוט ומהיר משיטות שכפול משנה מסורתיות. מכיוון ששיטה זו אינה משתמשת באנזימי הגבלה, ניתן לשכפל מוצרים ללא אתרי אנזים הגבלה.

חסרון הוא שערכות השיבוט של ת"א יקרות מאוד, ולכן השימוש בהן מוגבל. חוץ מזה, אין שיבוט כיווני; כך שההסתברות לשיבוט בכיוון ההפוך גדולה יותר.

כמה יצרנים מוכרים ערכות שיבוט TA. חלקם Invitrogen, QIAGEN ו- Premier Biosoft.