כיצד לספור מושבות במיקרוביולוגיה

אחת הדרכים הקלאסיות לקביעת ריכוז החיידקים בדגימה היא לדלל את הדגימה, לגדל את החיידקים על גבי צלחות ולספור את המושבות. החיידקים המצופים צומחים מיחידה היוצרת מושבה המורכבת מתא אחד או יותר למושבה גלויה שניתן לראות ולספור. חיידקים הם החיידק הנפוץ ביותר להעריך באמצעות ספירת צלחות. ספירת מושבות משמשת לאיתור וספירת חיידקים בקרקע, במים ובמזון. פרוטוקולים לספירת מושבות מדגישים גישה מדויקת ושיטתית.

אם אתה פשוט מורח דגימת חיידק על גבי צלחת אגר, תראה כל כך הרבה יחידות יוצרות מושבות שהמושבות הבודדות ישתלבו יחד, מה שהופך אותן לבלתי אפשריות לספירה. כדי לפתור בעיה זו, מערבבים את הדגימה למדיום נוזלי, לוקחים כמות קטנה של תערובת ומדללים אותה עוד יותר. חזור על תהליך זה שש עד עשר פעמים. מורחים את הדילול הסופי על צלחת אגר ודוגרים אותו במשך ארבעה עד שבעה ימים לפני שסופרים את המושבות.

הטריק העיקרי בספירת מושבות הוא לספור כל נקודת מושבה פעם אחת. גישה אחת היא להציב את צלחת הפטרי על רקע רשת ולספור את המושבות בכל תא רשת, לנוע בתבנית שיטתית דרך כל התאים. סימון מושבות שנספרו בגב המנה פטרי יכול גם להיות גישה מועילה. באופן כללי, יהיה עליכם לספור לפחות שלוש צלחות; השתמש רק בפלטות המכילות 30 עד 300 מושבות כדי להסיק מסקנות חזקות, מציעה רשת מיקרוביולוגיה, חברה המספקת שירותי ייעוץ למעבדות וליצרנים. צלחות עם מושבות שמספרן רב מדי לספירה או עם מעט מדי מושבות צריך להיות מצופה מחדש מדילול חדש.

טעות אנוש מוסיפה לזמן הכרוך בספירת מושבות באופן ידני. כדי לשפר את הדיוק והיעילות, הצב את צלחת הפטרי במכשיר ספירת מושבות אוטומטית. דלפקים אוטומטיים של מושבות מצלמים תמונה של המנה, מפרידים את המושבות מהרקע ואז משתמשים באלגוריתם כדי לספור את המושבות בצלחת. לאלגוריתמים עלולים להתקשות להבדיל מושבות כאשר שתי מושבות או יותר נוגעות בקצוות, כך שזהו אזור של פיתוח תוכנה מתמשך.

לדיוק חישוב צפיפות החיידקים מספירת מושבות אכן יש מגבלות מסוימות. יחידות יוצרות מושבות יכולות להיות תא בודד, שרשרת תאים או גוש תאים שלם. ההנחה היא שמושבה מייצגת תא אחד, ולכן ריכוזים המחושבים מספירת מושבות יכולים להיות נמוכים. חיידקים שונים זקוקים לתנאי צמיחה שונים, והמושבות שעל הצלחת מייצגות רק את אותם חיידקים המשגשגים בתקשורת הגדילה באותם תנאי דגירה. בנוסף, ספירת מושבות אינה רושמת תאים מתים, שיקול חשוב כאשר אתה זקוק לריכוז התאים במדגם המקורי.