Scienziati e tecnici hanno spesso bisogno di calcolare la concentrazione di cellule in una sospensione. Ad esempio, quando a un paziente viene prelevato il sangue presso lo studio di un medico, il laboratorio può utilizzare determinati metodi per cercare la quantità di globuli bianchi in un dato volume di sangue. Ciò fornisce al medico molte informazioni sulla salute della sua paziente, in particolare sul suo sistema immunitario e se sta combattendo un'infezione o un'altra malattia. Test come questo possono cercare molte altre cellule nel sangue così come il liquido spinale e altri fluidi corporei, come il conteggio degli spermatozoi nello sperma per scopi di fertilità. Gli scienziati calcolano anche le concentrazioni cellulari di batteri, lieviti e altri microrganismi per numerosi scopi che vanno dalla ricerca ecologica alle tecnologie industriali. Una delle tecniche più comuni viene insegnata anche in molte classi di biologia universitaria e utilizza un dispositivo chiamato camera di conteggio.
Prima che la sospensione cellulare possa entrare nella camera di conteggio, potrebbe aver bisogno di una diluizione perché potrebbe contenere migliaia o milioni di cellule. In tal caso, le celle non possono essere ragionevolmente contate. Per diluire il campione, utilizzare una pipetta sterile per inserire dieci microlitri della soluzione cellulare in una provetta contenente 90 microlitri di un diluente. Il tipo di diluente dipenderà dal tipo di cellula. Mescola bene. Questa soluzione è ora dieci volte più diluita del campione iniziale, quindi il suo fattore di diluizione è 10-1. Etichettalo. Ripetere questa operazione più volte, utilizzando ogni volta una pipetta sterile, finché la soluzione non è sufficientemente diluita. Se l'hai diluita una seconda volta, la seconda provetta era 100 volte più diluita della soluzione iniziale, quindi il fattore di diluizione era 10-2 e così via.
Potrebbe essere necessario provare diverse diluizioni per determinare il fattore di diluizione corretto per la camera di conteggio. Una camera di conteggio è fondamentalmente una scatola rettangolare molto piccola, chiara, con una profondità precisa e una griglia precisa inscritta nella parte superiore. È anche noto come emocitometro o talvolta emocitometro. Lo scopo è che la sospensione sia sufficientemente diluita che, quando viene osservata nella camera di conteggio, nessuna cellula si sovrapponga e sia distribuita in tutta la griglia in modo uniforme. Pipettare la sospensione diluita contenente le cellule nel pozzetto della camera di conteggio, dove si depositerà nella camera della griglia per azione capillare. Posizionare la camera di conteggio sul tavolino del microscopio e visualizzarla a bassa potenza.
La griglia contiene quadrati composti da quadrati ancora più piccoli. Seleziona circa quattro o cinque quadrati, o quanti ne hai bisogno per contare almeno 100 celle, secondo uno schema a tua scelta, come i quattro angoli e un quadrato centrale. Se le celle sono grandi, questi potrebbero essere i quadrati grandi, ma se le celle sono piccole, potresti invece scegliere i quadrati più piccoli.
Il volume specifico di ciascun quadrato della griglia può variare contando il produttore della camera, ma spesso la profondità della camera è 0,1 millimetri, l'area dei quadrati grandi è di 1 millimetro quadrato e l'area dei quadrati più piccoli è di 0,04 quadrati millimetri. I quadrati più grandi, quindi, hanno un volume di 0,1 millimetri cubi. Per questo esempio, supponiamo di aver contato un totale di 103 cellule in cinque quadrati e di aver diluito il campione iniziale fino a quando il fattore di diluizione è stato 10-2.
Se ogni quadrato della griglia ha un volume di 0,1 millimetri cubi e ne sono stati contati cinque, il volume totale della camera che è stato contato era di 0,5 millimetri cubi e c'erano 103 celle. Raddoppiato per renderlo 1 millimetro cubo, otterrebbe 206 celle. Un centimetro cubo equivale a 1 millilitro, che è una misura utile per i liquidi. Ci sono 1.000 millimetri cubi in un centimetro cubo. Quindi, se ci fosse stato un centimetro cubo, o un millilitro, di sospensione, avresti contato 206.000 (206 x 1.000) celle. Ecco come appare come un'equazione:
Volume del quadrato della griglia × numero di quadrati contati = volume totale della sospensione contata
Numero di cellule ÷ volume della sospensione contata = numero di cellule per millimetri cubi
Conteggio delle cellule per millimetri cubi × 1000 = conteggio delle cellule per millilitro
Sarà necessario tenere conto di qualsiasi diluizione eseguita per rendere la soluzione iniziale contabile al microscopio. In questo esempio, il fattore di diluizione è 10-2. Per calcolare la concentrazione iniziale della soluzione:
Conteggio cellulare per millilitro ÷ fattore di diluizione = concentrazione cellulare
Per questo esempio, il conteggio delle cellule per millilitro è 206.000 e dividendolo per 10-2 (0,01) fornisce una concentrazione cellulare di 20.600.000 cellule per millilitro nel campione iniziale.