Il motivo principale per cui si colora un campione prima di metterlo al microscopio è osservarlo meglio, ma la colorazione fa molto di più che evidenziare semplicemente i contorni delle cellule. Alcune macchie possono penetrare nelle pareti cellulari ed evidenziare i componenti cellulari, e questo può aiutare gli scienziati a visualizzare i processi metabolici. Le macchie aiutano anche a distinguere tra cellule vive e morte. Inoltre, la colorazione consente agli scienziati di contare il numero di cellule di un particolare tipo all'interno di una certa biomassa. Esistono venti o più diversi tipi di macchie e ognuna ha il suo scopo.
TL; DR (troppo lungo; non ho letto)
Lo scopo principale della colorazione è evidenziare cellule e parti di cellule. Esistono oltre 20 diversi tipi di macchie e il tipo di macchia che usi dipende da cosa stai cercando.
Tipi di macchie
La scelta della macchia dipende da cosa stai cercando. Non tutte le colorazioni sono adatte per le cellule viventi, ma quelle che lo sono includono il marrone Bismarck, il rosso toluene, il blu Nilo e il rosso Nilo e alcuni fluorescenti usati per evidenziare il DNA. Alcune macchie evidenziano le spore, altre rilevano lipidi e proteine e alcune cambiano colore in presenza di amidi. Lo scopo dell'esame determina il miglior tipo di macchia da utilizzare. Ad esempio, un medico che esegue un PAP test utilizzerebbe Eosina Y. È un colorante fluorescente acido che diventa rosso quando entra in contatto con i globuli rossi, il citoplasma e le membrane cellulari. È anche usato per testare il midollo.
In alcuni casi, un investigatore può utilizzare più di una macchia. Ad esempio, l'ematossilina è una macchia che trasforma i nuclei cellulari in blu. Se usato insieme all'eosina, che trasforma le altre parti della cellula in rosso o in rosa, fornisce un contrasto più forte e rende i nuclei più facili da differenziare. Gli strisci PAP e i campioni di midollo sanguigno sono più facili da esaminare quando queste due colorazioni vengono utilizzate insieme.
Colorazione di Gram: Gli operatori ospedalieri usano la colorazione di Gram per identificare i batteri nocivi. Si tratta in realtà di una serie di coloranti che hanno effetti diversi su diversi tipi di batteri e forniscono ai medici un importante strumento diagnostico. La colorazione di Gram è un processo in tre parti. Nella prima viene aggiunto il cristalvioletto di Hucker, che colora tutti i batteri di un colore viola uniforme. Nella fase successiva, viene aggiunta la macchia di iodio, che fa aderire il colore alle cellule Gram-positive, che sono principalmente Staphylococcus e Streptococcus. La macchia viene lavata via, lasciando le cellule Gram-positive con un distinto colore viola; quindi viene introdotta una terza colorazione, Safranine O, per migliorare il contrasto tra i batteri Gram-negativi e il resto del materiale nel vetrino.
Procedura di colorazione
Quando si prepara un campione su un vetrino, è possibile montarlo a secco o a umido, affettarlo in una sezione sottile o spalmarlo. Quando si utilizza una macchia, la procedura usuale è quella di montare il campione a umido, il che significa mettere una goccia d'acqua sul vetrino, mettere il campione nell'acqua e coprirlo con un vetrino coprioggetto. Quindi si applica la macchia su un angolo del vetrino con un contagocce e si lascia che venga attirata verso il campione per azione capillare. Aiuta a mettere un tovagliolo di carta sul lato opposto dello scivolo per attirare l'acqua. Una volta che la macchia si è diffusa su tutto il vetrino, il campione è pronto per l'esame.