Il brodo nutriente liquido viene utilizzato per la coltura di batteri come l'Escherichia coli. Le ricette per questo brodo variano a seconda della specie batterica e della presenza di modificazioni genetiche, ad esempio la resistenza agli antibiotici. Il brodo può essere solidificato aggiungendo agar, che consente ai batteri di formare colonie distinte, mentre nella coltura liquida si disperdono semplicemente in tutto il volume. Questa è una tecnica di base ma essenziale per metodi avanzati come la clonazione genica o i test microbiologici. Questo articolo presuppone che i ceppi standard di Escherichia coli da laboratorio debbano essere coltivati su piastre di agar (o piastre Petri) di brodo Luria (LB).
Pesare 10 grammi di triptone batterico, 5 grammi di estratto di lievito, 5 grammi di cloruro di sodio, 15 grammi di agar o agarosio e 1 millilitro di idrossido di sodio 1N. Mescolare questi con un volume di acqua sterile distillata e sterilizzata in autoclave fino ad ottenere 1 litro di terreno. Autoclavare il terreno in flaconi o flaconi con tappo allentato per 25 minuti. Lasciare raffreddare a circa 50 gradi Celsius prima di aggiungere i reagenti che verranno distrutti a fuoco vivo, come antibiotici o altri integratori alimentari.
Lasciare raffreddare il terreno autoclavato a 50 gradi Celsius e non inferiore a 45 gradi Celsius, poiché l'agar si fisserà nel suo contenitore prima di poter essere versato. Procurati delle piastre di Petri sterili e versane una quantità sufficiente a coprire l'intera superficie della piastra e almeno metà della sua profondità. Evitare di riempire eccessivamente le piastre e preferibilmente non lasciare che l'agar entri in contatto con il bordo superiore del piatto. Consentire alle piastre di solidificare in un ambiente sterile (ad esempio sotto una cappa a flusso laminare) lasciando i coperchi aperti e in un angolo della cappa.
Asciugare i piatti. Sebbene le piastre possano essere utilizzate non appena sono impostate, sulla superficie dell'agar sarà presente dell'umidità, che impedirà alle colonie batteriche di aderire sufficientemente. Pertanto, è meglio asciugare le piastre prima di applicare eventuali batteri, ad esempio lasciandole riposare a temperatura ambiente per alcuni giorni o per mezz'ora sotto cappa a flusso laminare o a 37 gradi Celsius incubatrice.
Conserva i piatti. I piatti secchi devono essere impilati capovolti (invertiti) sui loro coperchi e riportati al loro originale confezione, chiusa con nastro adesivo e avvolta in un foglio per proteggere dalla luce o in un apposito contenitore. Scrivere sempre la data di preparazione sui piatti ed evitare di utilizzarli se i piatti hanno più di 2 mesi.
Riferimenti
- "Protocolli attuali in biologia molecolare"; Karen Elbing e Roger Brent; 2002
Suggerimenti
- Eseguire il maggior numero possibile di operazioni sopra (preferibilmente tutte) in un ambiente sterile (ad es. fiamme libere o una cappa a flusso laminare) per impedire ai contaminanti batterici trasportati dall'aria di entrare e crescere nel media.
Circa l'autore
Palmer Owyoung ha conseguito un Master of Arts in International Business presso l'Università della California a San Diego e a Laureato in sociologia presso l'Università della California a Santa Barbara ed è un esperto molecolare biologo. Svolge attività di scrittore freelance dal 2006. Oltre a scrivere, è un trader Forex a tempo pieno e un Internet marketer.
Crediti fotografici
Jupiterimages/Comstock/Getty Images
