Il calcolo del titolo di un virus è un modo complicato per dire che uno scienziato sta contando il numero di virus in un particolare campione. Per calcolare i titoli dei virus, gli scienziati infettano piastre di batteri in crescita con soluzioni virali a concentrazioni variabili e calcolare il numero di virus nella soluzione originale contando i batteri che sono morti a causa del virus infezione.
Indossare i guanti, riempire 10 provette di coltura con 9 ml di brodo ed etichettarle "10^-1", "10^-2", "10^-3" e così via fino a “10^-10”. Queste provette verranno utilizzate per le diluizioni seriali virali utilizzate per calcolare il fago titolo. Poiché i virus possono raggiungere concentrazioni incredibilmente elevate, è necessario diluirli per contarli in modo efficace. Ogni provetta rappresenta una diluizione dieci volte superiore del virus.
Prendi 1 ml della coltura mista dalla provetta etichettata "10^-1" e trasferiscilo con una nuova pipetta nella provetta successiva, etichettata "10^-2". Mescola anche questo tubo.
Continua questo schema per creare una serie di diluizioni seriali. Ti ritroverai con 9 provette da 9 ml e 1 provetta da 10 ml. Le cariche virali nelle tue provette verranno diluite ovunque da 10 volte (la tua prima provetta) o 100 volte (la tua seconda provetta) a dieci miliardi di volte (la tua provetta finale).
Aggiungi due gocce di coltura batterica al tuo agar e mescola delicatamente. Questi sono i batteri che verranno uccisi, permettendoti di contare il numero di particelle di virus in una particolare soluzione.
Aggiungere 1 ml di ciascuna diluizione seriale alla corrispondente provetta di agar mentre le provette sono ancora nel bagno di acqua calda. Ad esempio, 1 ml della tua diluizione seriale 10^-1 dovrebbe andare nella provetta di agar etichettata "10^-1".
Mescolare ogni provetta e poi versare ciascuna provetta nella piastra Petri con l'etichetta corrispondente. Questo creerà un sottile strato di agar che è stato inoculato con batteri e virus in ogni piastra. Lascia che le piastre crescano durante la notte in un'incubatrice.
Prendi le tue piastre dall'incubatrice ed esaminale. Dovresti vedere aree nuvolose in tutta la piastra dove sono cresciuti i batteri, ad eccezione di piccoli punti chiari chiamati placche. Queste placche sono macchie di batteri morti e ogni placca rappresenta un virus.
Prendi il numero di placche nel tuo piatto e moltiplicalo per 10. Se contassi 157 placche, otterresti 1570.
Moltiplica il numero ottenuto nel passaggio precedente per l'inverso del numero sulla provetta di diluizione. Ad esempio, se la lastra che hai selezionato era la lastra 10^-5, moltiplicheresti 1570 per 10^5 per ottenere 157000000. Questo numero finale è il titolo del tuo fago e rappresenta il numero di virus per ml della tua coltura originale.
