La clonazione di TA è un metodo semplice e conveniente per subclonare i prodotti della reazione a catena della polimerasi (PCR). "TA" è l'abbreviazione di "timina" e "adenina". Questa tecnica di clonazione utilizza la capacità della timina di ibridarsi con l'adenina in presenza di ligasi. Non vengono utilizzati enzimi di restrizione, a differenza del tradizionale metodo di subclonazione. Invece, i prodotti della PCR vengono amplificati utilizzando enzimi Taq polimerasi.
Metodo
Il metodo di clonazione di TA utilizza l'attività della transferasi terminale di determinati sbalzi di acido desossiribonucleico su ciascuna estremità del prodotto PCR.
Un vettore di clonazione linearizzato con singole, tre sporgenze prime-T (3'-T) chiamato vettore T viene utilizzato per clonare questo prodotto PCR in un vettore plasmidico. Il prodotto della PCR è miscelato con questo vettore in alta proporzione.
Alla miscela viene aggiunta la DNA ligasi (ligasi T4), che consente ai due prodotti di ibridarsi e unirsi.
Vantaggi e svantaggi
La clonazione di TA è un metodo conveniente per sottoclonare i prodotti della PCR nel vettore linearizzato ed è molto più semplice e veloce dei metodi di sottoclonazione tradizionali. Poiché questo metodo non utilizza enzimi di restrizione, è possibile clonare prodotti senza siti di enzimi di restrizione.
Uno svantaggio è che i kit di clonazione TA sono molto costosi e, quindi, il loro uso è limitato. Inoltre, non c'è clonazione direzionale; quindi la probabilità di clonare in una direzione opposta è maggiore.
Kit di clonazione TA
Diversi produttori vendono kit di clonazione TA. Alcuni sono Invitrogen, QIAGEN e Premier Biosoft.