Il Western blot test, chiamato anche immunoblotting, è un test per una specifica proteina all'interno di una miscela proteica. Il Western blot test viene eseguito dopo l'elettroforesi su gel o un test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) e utilizza anticorpi per identificare proteine specifiche.
L'elettroforesi su gel di poliacrilammide di sodio dodecil solfato (SDS-PAGE) è un test comune utilizzato per separare le proteine da utilizzare nel Western blot. Le proteine sono separate in base al peso e alle proprietà elettriche mentre si muovono attraverso una matrice di gel.
Il test ELISA utilizza enzimi o anticorpi attaccati a una superficie solida per creare la superficie del test. Un campione viene quindi aggiunto alla superficie di prova. Anticorpi o enzimi che reagiscono o si legano alle proteine indicano un risultato positivo.
Il Western blot test viene eseguito dopo l'elettroforesi su gel. Le proteine separate vengono trasferite (o macchiate) su membrane di nitrocellulosa o nylon e identificate da anticorpi specifici che sono marcati da una proteina secondaria.
Il test Western blot viene utilizzato per confermare i risultati positivi dei test di elettroforesi su gel o ELISA. Il Western blot test può identificare le proteine in modo più specifico e può escludere falsi positivi.