Tracciare un grafico della concentrazione del prodotto in funzione del tempo per i dati della prima provetta del test enzimatico. Nota: l'asse orizzontale dovrebbe essere "tempo" e l'asse verticale dovrebbe essere "concentrazione del prodotto".
Calcola la linea di regressione lineare per i punti dati che hai tracciato nella Sezione 1, Passaggio 1. Mentre Excel e i calcolatori grafici possono facilmente determinare questo modello lineare, puoi ricavare una stima della regressione pendenza della linea dividendo la differenza di concentrazione del prodotto tra punti dati adiacenti per la loro differenza di tempo.
Registrare la pendenza della linea di regressione lineare della Sezione 1, Passaggio 2 come "velocità di reazione iniziale (Vo)". Nota: nel modello della linea di regressione "[concentrazione del prodotto] = m [tempo] + b", il coefficiente "m" è il pendenza.
Ripetere i passaggi 1, 2 e 3 per il resto delle provette nel dosaggio.
Tracciare l'inverso della concentrazione del substrato per ciascuna provetta rispetto all'inverso della sua velocità di reazione iniziale (dalla Sezione 1, Passaggio 4). Ad esempio, se la velocità iniziale per una provetta con una concentrazione di substrato iniziale di 50 micromolari (uM) era 80 uM/s, l'inverso sarebbe 1/50 uM per la concentrazione del substrato e 1/80 uM/s per l'iniziale velocità. Nota: la concentrazione inversa del substrato dovrebbe essere sull'asse orizzontale e la velocità iniziale inversa dovrebbe essere sull'asse verticale.
Nota: la concentrazione del substrato dovrebbe essere sull'asse orizzontale e la velocità di reazione iniziale dovrebbe essere sull'asse verticale.
Determina la linea di regressione lineare per il grafico che hai tracciato nella Sezione 2, Passaggio 1. Nota: poiché sarà necessario conoscere l'intersezione con y per la linea di regressione, è necessario inserire i punti da Sezione 2, Passaggio 1 in Excel o in una calcolatrice grafica e utilizzare la modellazione di regressione integrata funzionalità.
Dividi 1 per l'intersezione con y dalla linea di regressione lineare. Questo ti darà il valore dell'inverso di Vmax, la massima velocità di reazione per l'enzima. Nota: se il modello di regressione lineare assume la forma "[Inverse Vo] = m [Inverse Substrate Conc.] + b", allora il valore di "b" sarebbe l'intersezione con y. Dividi 1 per "b" per calcolare l'inverso di Vmax.
Dividere 1 per il risultato della Sezione 2, Passaggio 3 per calcolare il valore effettivo di Vmax.
Determinare la concentrazione dell'enzima nel dosaggio originale (vedere i dati grezzi). Nota: la concentrazione dell'enzima è la stessa per tutte le provette; solo le concentrazioni di substrato variano nel dosaggio.
Dividere il Vmax (dalla Sezione 2, Passaggio 4) per la concentrazione dell'enzima (dalla Sezione 2, Passaggio 5). Il risultato è il valore di Kcat.
Un copywriter con sede a Chicago, Andy Pasquesi ha una vasta esperienza nella scrittura per il settore automobilistico (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), servizi finanziari (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), i clienti della sanità (Abbott) e dei beni di consumo (Sony, Motorola, Knoll). Ha conseguito un Bachelor of Arts in inglese presso l'Università di Harvard, ma non gli interessa la virgola di Oxford.