Hogyan mérjük a baktériumok szaporodását a Petri-ételekben

A baktériumokat Petri-csészékben bakteriális agar néven ismert szilárd táptalajon tenyésztik, ahol emelt, kör alakú telepek képződnek. Az egyes baktériumsejtekkel ellentétben a kolónia olyan baktériumcsoport, amely elég nagy ahhoz, hogy szabad szemmel látható legyen. A baktériumok szaporodását egyszerűen meg lehet mérni, hogy hány telep van jelen; kvantitatívabb módszerek közé tartozik azonban a számláló kamra, vagy gyakrabban az életképes lemezszám használata. Ez utóbbit használják leggyakrabban, mivel kvalitatív információkat is szolgáltat, például a változó növekedési körülmények hatásáról. Mivel egy petri-csészében több milliárd baktérium lehet, a méréshez először meg kell hígítani a mintát, hogy meg lehessen számolni a telepek számát.

Egy kémcsőben adjon 10 mikroliter kiindulási baktérium tenyészetet 90 mikroliter hígítóközeghez. Zárja le szorosan a cső fedelét, és finoman vortexelje, hogy homogén keveréket kapjon. Most a minta az eredeti koncentrációjának tizede.

Töltsön 10 mikroliteret az új mintából egy új kémcsőbe, amely 90 mikroliter hígítóközeget tartalmaz, majd keverje össze újra. Az eredmény az lesz, hogy a minta tovább hígul - ez az eredeti koncentrációjának egy százada lesz. Ismételje meg ezt többször, amíg az eredeti mintát nem hígítják 10

instagram story viewer
4 és 1010 alkalommal. Győződjön meg arról, hogy mindegyik cső megfelelő hígítással van ellátva (például 10)-1, 10-2 stb.

Az utolsó befejezett hígítás 10 mikroliterét adagoljuk az agarlemezre. A szétszóródó él segítségével ossza el a baktériumoldatot az agarlemez teljes felületén. Ismételje meg ezt még két lemeznél. Szintén gyakori, hogy ezeket a lépéseket más hígítási szintekkel hajtjuk végre összehasonlítás céljából. Ügyeljen arra, hogy a lemezek alját felcímkézze. Helyezze vissza az egyes lemezek fedelét, és hagyja az agarlemezeket néhány percig száradni vagy laboratóriumi padon, láng alatt, vagy inkubátorban. Helyezze a lemezeket az inkubátorba, amelyet a baktériumtörzsnek megfelelő hőmérsékletre kell beállítani. Hagyja 12-16 órán át növekedni.

A telepeknek 16 óra múlva láthatónak kell lenniük; egyes genetikai módosítások azonban hosszabb időt igényelhetnek (például színfejlődés). Ha a telepek megfigyelhetők, vegye ki a lemezeket, és keressen olyanokat, amelyek 30 és 300 telep között vannak. Állandó jelző segítségével tegyen egy pontot a petri-csésze aljára - az agar oldala, nem a fedele -, bárhol egy telep látható az agaron keresztül. Számolja meg az egyes jelölő pontokat. Ismételje meg az egyes ételeket.

A kísérlet kiindulási tenyészetében lévő baktériumok mennyiségének méréséhez a hígítást meg kell fordítani a számításokban, két helyen. Először is, amikor a kémcsőből vett egy mikrolitert a petri-csészébe, a hígított minta tizedét vette, így mindent meg kell szorozni 10-vel ennek megfordításához. Ezenkívül, ha a kémcsőben a hígítási tényező például 10-7, akkor a telepek számát meg kell szorozni 10-vel7 a hígítási hatás megfordítása érdekében. Egyszerűen távolítsa el a negatív előjelet a kitevőről a számítások során. Használja a következő képletet:

[Megszámlált telepek száma] × 10 × [hányszor kell a mintát megsokszorozni, hogy elérjük az eredeti koncentrációt: például 105] = A telepképző egységek száma (CFU) a kiindulási tenyészet milliliterében. Ez a baktérium növekedés a petri-csészéiben.

Teachs.ru
  • Ossza meg
instagram viewer