Znanstvenici i tehničari često trebaju izračunati koncentraciju stanica u suspenziji. Primjerice, kada se pacijentu vadi krv u liječničkoj ordinaciji, laboratorij može koristiti određene metode za traženje količine bijelih krvnih stanica u zadanom volumenu krvi. To liječniku daje puno informacija o zdravlju njezinog pacijenta, posebno njegovom imunološkom sustavu i bori li se protiv infekcije ili neke druge bolesti. Ovakvi testovi mogu potražiti mnoge druge stanice u krvi, kao i kralježničnu tekućinu i druge tjelesne tekućine, poput broja spermatozoida u sjemenu u svrhu plodnosti. Znanstvenici također izračunavaju staničnu koncentraciju bakterija, kvasca i drugih mikroorganizama za brojne svrhe, od ekoloških istraživanja do industrijskih tehnologija. Jedna od najčešćih tehnika podučava se i na mnogim koledžima biologije, a koristi se uređajem koji se naziva komora za brojanje.
Prije nego što ćelijska suspenzija može ući u komoru za brojanje, možda će joj trebati razrjeđenje jer može sadržavati tisuće ili milijune stanica. U tom se slučaju stanice ne mogu razumno izbrojati. Da biste razrijedili uzorak, pomoću sterilne pipete stavite deset mikrolitara stanične otopine u epruvetu koja sadrži 90 mikrolitara razrjeđivača. Vrsta razrjeđivača ovisit će o vrsti stanice. Dobro ga izmiješajte. Ova otopina je sada deset puta razrijeđenija od početnog uzorka, tako da je njezin faktor razrjeđenja 10
-1. Označi ga. Ponovite to nekoliko puta, svaki put pomoću sterilne pipete, dok se otopina ne razrijedi dovoljno. Ako ste ga razrijedili drugi put, druga je epruveta bila 100 puta razrijeđenija od početne otopine, pa je faktor razrjeđenja bio 10-2 i tako dalje.Možda ćete trebati probati nekoliko razrjeđenja kako biste odredili pravi faktor razrjeđenja za komoru za brojanje. Komora za brojanje u osnovi je vrlo mala, prozirna, pravokutna kutija precizne dubine i precizne rešetke upisane preko vrha. Također je poznat kao hemocitometar, ili ponekad hemacitometar. Cilj je da se suspenzija razrijedi dovoljno da se, kad se gleda u komori za brojanje, stanice ne preklapaju i ravnomjerno rasporede po rešetki. Razrijeđenu suspenziju koja sadrži stanice pipetirajte u jažicu u komori za brojanje, gdje će se kapilarnim djelovanjem taložiti u mrežnu komoru. Stavite komoru za brojanje na pozornicu mikroskopa i gledajte je pod malom snagom.
Rešetka sadrži kvadrate koji su napravljeni od još manjih kvadrata. Odaberite približno četiri ili pet kvadrata, ili koliko god ih trebate da izbrojite najmanje 100 ćelija, u uzorku po vašem izboru, poput četiri kuta i središnjeg kvadrata. Ako su stanice velike, to bi mogli biti veliki kvadrati, ali ako su stanice male, umjesto njih možete odabrati manje kvadrate.
Specifični volumen svakog kvadrata rešetke može se razlikovati ovisno o proizvođaču komore za brojanje, ali često je dubina komore 0,1 milimetara, površina velikih kvadrata je 1 kvadratni milimetar, a površina manjih kvadrata 0,04 kvadrata milimetara. Znači, veći kvadrati imaju zapreminu od 0,1 kubnih milimetara. Za ovaj primjer pretpostavimo da ste izbrojali ukupno 103 stanice u pet kvadrata i da ste početni uzorak razrijedili dok faktor razrjeđenja nije bio 10-2.
Ako svaki kvadrat mreže ima zapreminu od 0,1 kubnih milimetara i izbrojano ih je pet, tada je ukupan volumen prebrojane komore bio 0,5 kubnih milimetara, a postojale su 103 stanice. Udvostručeno da bi postalo 1 kubni milimetar značilo bi 206 stanica. Jedan kubni centimetar ekvivalent je 1 mililitru, što je korisno mjerenje za tekućine. U kubnom centimetru ima 1.000 kubičnih milimetara. Stoga, da je bilo kubnog centimetra ili mililitra suspenzije, izbrojali biste 206 000 (206 x 1 000) stanica. Ovako izgleda kao jednadžba:
Volumen kvadrata mreže × broj prebrojanih kvadrata = ukupni volumen prebrojane suspenzije
Broj stanica ÷ volumen prebrojane suspenzije = broj stanica u milimetrima u kockama
Broj stanica u milimetrima u kockama × 1000 = broj stanica u mililitru
Morat ćete uzeti u obzir svako izvedeno razrjeđivanje kako biste početnu otopinu izbrojili pod mikroskopom. U ovom primjeru faktor razrjeđenja je 10-2. Da biste izračunali početnu koncentraciju otopine:
Broj stanica po mililitru ÷ faktor razrjeđenja = koncentracija stanica
U ovom primjeru, broj stanica po mililitru iznosi 206 000, a dijeli se s 10-2 (0,01) daje koncentraciju stanica od 20 600 000 stanica po mililitru u početnom uzorku.
