Učitelj vam predaje uzorak bakterija i pita vas: Koliko je održivih mikroorganizama u ovom uzorku? Što to znači i kako to shvaćate? Jedan od metoda je pronalaženje broja jedinice za formiranje kolonija(CFU).
Što su CFU?
CFU se odnose na broj pojedinačnih kolonija bilo kojeg mikroorganizma koji rastu na tanjuru medija. Ova vrijednost zauzvrat predstavlja broj bakterija sposobnih za razmnožavanje jer su stvorile kolonije na ploči. Postoji formula CFU koja uključuje uzorkovanje.
Kako pronaći CFU?
Brojanje broja bakterija u tekućem uzorku vrlo je teško. Previše ih je, a premali su. Nadalje, neki od njih mogu biti mrtvi, a drugi živi, a mrtvi se ne bi trebali računati u ukupni broj. Zanima vas samo održiv bakterije ili bakterije koje se mogu replicirati. Pa kako možete shvatiti koliko bakterija imate?
Na isti način na koji možete uzeti anketu od 1.000 ljudi i primijeniti je na 10.000 ljudi kako biste shvatili kako oni mogu razmišljati o određenoj temi. Možete pokušati uzeti mali dio vašeg izvornog uzorka i shvatiti koliko bakterija ima taj dio, a zatim izračunajte kako biste približno odredili koliko ih je moglo biti u izvorniku uzorak.
Korištenje razrjeđenja za pronalaženje CFU
Postupak za pronalaženje CFU-a određenog uzorka uključuje prvo razrjeđivanje tog uzorka. Zatim se razrjeđenja stave na ploče s ispravnim medijem za rast. Višestruka razrjeđenja često su dobra ideja jer izvorni uzorak može biti vrlo koncentriran.
Nakon dopuštanja bakterijama da rastu na pločama određeno vrijeme, pojedine kolonije broje se na tanjuru. Ako je uzorak bio previše koncentriran, umjesto pojedinih kolonija vidjet ćete veliko područje prekriveno rastom bakterija koje se naziva a travnjak. To znači da biste trebali dodatno razrijediti svoj uzorak i pokušati ponovno uzgajati kako biste mogli vidjeti pojedinačne kolonije.
Kako pojedine kolonije potječu od jedne bakterije koja se višestruko umnožila, samo se one računaju na CFU.
Eksperimentalni postupak za pronalaženje CFU
Primjer korištenja razrjeđenja za izračun CFU-a mogao bi ići na sljedeći način: Prvo, iz početnog uzorka koji vam daje vaš učitelj, uzmete 1 ml i tanjurirate. Sljedeći dan vidite da postoji travnjak bakterija. To znači da ne možete računati broj CFU-a. Sljedeći je korak razrjeđivanje.
Prvo uzmete 1 ml uzorka i razrijedite ga u 9 ml tekućeg medija. Budući da je razrjeđenje jedan dio uzorka na devet dijelova razrjeđivača, to se naziva razrjeđenjem 1:10. Zatim uzmete 1 ml razrjeđenja 1:10 i dodate 9 ml tekućeg medija. Ovo razrjeđenje je razrjeđenje 1: 100. Na kraju napravite razrjeđenje 1: 1.000 uzimajući 1 ml razrjeđenja 1: 100 i dodajući 9 ml tekućeg medija. Za svako razrjeđenje sada imate 10 ml razrijeđene bakterijske kulture.
Gotova razrjeđenja, na tanjuriće stavite 0,5 ml razrjeđenja. Obavezno označite ploče s kojima je razrijeđeno.
Sutradan se vratite i vidite da sve ploče imaju neke pojedinačne kolonije na sebi. Želite odabrati tanjur između 30 i 300 kolonija. Vidite da ploča za razrjeđivanje 1: 1.000 ima oko 10 kolonija, pa to znači da ste pretjerano razrijedili uzorak. Ta pločica neće biti od pomoći u pronalaženju CFU-a.
Ploča za razrjeđivanje 1:10 ima mnogo kolonija, možda i više od 300. U tom slučaju možete ići na tanjur 1: 100. Prebrojite kolonije na ovom tanjuru i ustanovite da ima 179 kolonija. To znači da 0,5 ml otopine 1: 100 sadrži 179 CFU. Ali što je s originalnim uzorkom?
Što je izračun CFU?
Sad kad imate neke podatke, možete izvršiti izračun CFU-a u izvornom uzorku.
1. Uzmite količinu koju ste posadili (0,5 ml) i pomnožite s faktorom razrjeđenja (0,01) da se dobije 0,005. To morate učiniti kako biste pronašli faktor razrjeđenja koji je dao vaš CFU broj. Ovdje vam je pola mililitara razrjeđenja 1: 100 omogućilo da izbrojite CFU.
2. Podijelite CFU iz razrjeđenja (179) s rezultatom iz koraka 1 (0,005) da se dobije 35 800 CFU.
To znači da izvorni 1 ml uzorka koji je razrijeđen sadrži 35 800 CFU. Drugi način da se to kaže je reći da izvorni uzorak ima 35.800 CFU / ml.
CFU je izvrstan alat za pronalaženje broja bakterija, gljivica ili bilo kojih mikroorganizama u danom uzorku. Ovdje opisana metoda oblaganja posebno je korisna za vrlo koncentrirane uzorke ili organizme koji ne rastu dobro u tekućoj kulturi.