Znanstvenici koriste protočnu citometriju za razlikovanje različitih vrsta stanica ili mikroskopskih organizama. To je alat koji se koristi u mnogim primjenama poput medicinske dijagnostike ili forenzičke patologije. Iako je ovu eksperimentalnu tehniku prilično lako izvesti, proizvedena je analiza složenih podataka protočnim citometrom teže je zbog više eksperimentalnih čimbenika i / ili citometra parametri. Kao takva, rutina je da se citometrijski podaci vizualiziraju i analiziraju pomoću sofisticiranih profesionalnih programa poput CELLQuest ili FlowJo. Upoznavanje s tehnikama protočne citometrije, strojevima i softverom neophodno je kako bi se razumjeli rezultati koji su rezultat njih eksperimenti.
Pojasnite cilj eksperimenta pitanjem: "Koje je pitanje ili hipoteza istraženo?" Ovo će biti potreban za prilagodbu sirovih rezultata odgovarajućem formatu i postavkama za daljnju analizu statističkom citometrijom softver. Napravite sve potrebne promjene kako bi se podaci prikazali s odgovarajućim postavkama (npr. Pozitivne stanice, negativni otvori, intenzitet fluorescencije, populacije stanica itd.).
Nađi vrata. Stanice se mogu grupirati ili jednostavno promatrati skupljene na dijagramu gustoće ili konturnom dijagramu. Skupine se često razdvajaju ovisno o njihovom identitetu. Ako se jedna skupina vrlo intenzivno boji na određenom biljegu ili antitijelu, zaključuje se da svi članovi te skupine imaju identitet određenog staničnog tipa, koji izražava taj marker. Uobičajeno je pronaći stanice koje su pozitivne na više od jednog od ovih markera, a te su stanice obično međuprodukt i označene kao "dvostruko pozitivne".
Pogledajte raspršene slike. Način na koji se skupine stanica šire na raspršenom grafikonu pokazatelj je veličine stanica. Stanice s vrlo velikim ili velikim raspršivanjem obično su velike stanice; međutim, oni mogu biti veliki samo zato što sadrže visok udio citoplazme ili mogu biti visoki jer imaju vrlo veliku jezgru. Ovisno o biologiji koja se istražuje, to će se, naravno, jako razlikovati od eksperimenta.
Pogledajte brojeve. Prilagodite grafikone tako da prikazuju različite parametre na jednoj osi (obično osi X), a istovremeno zadržavate brojanje na osi Y. To ukazuje na udio populacije uzorka koji su pozitivni za određeni parametar, kao a Vrhunac će se normalno primijetiti u pozitivno obojenom uzorku, koji neće biti u negativnoj kontroli uzorak.
Pogledajte histograme s više parametara. Prilagođavanjem osi X i osi Y svakoj od njih predstavlja različiti parametar koji je bio istraženo tijekom eksperimenta, moguće je dublje razumjeti svojstva uzorka. Na primjer, postavljanjem osi X na crvenu fluorescenciju, a osi Y na zelenu fluorescenciju, vrata u obliku kvadrata mogu se izračunati za uzorak pokazuje četiri regije kvadranta u kojima su stanice prisutne i obojene crvenom ili zelenom fluorescencijom, obje boje ili nijednom svi. To omogućuje da se heterogeni uzorak podijeli na njegove sastavne dijelove i da se preklapajuće cjeline vizualiziraju i kvantificiraju.
Reference
- “Analiza podataka protočne citometrije”; Susan Sharrow; 1991
- „Protočna citometrija: instrumentacija i analiza podataka“; Marvin Van Dila; 1985
- “Protokoli protočne citometrije”; Tereza i Robert Hawley; 2004
o autoru
Palmer Owyoung magistrirao je međunarodno poslovanje na Kalifornijskom sveučilištu u San Diegu i Diplomirani umjetnik sociologije sa Kalifornijskog sveučilišta u Santa Barbari i školovani je molekular biolog. Slobodni je pisac od 2006. godine. Uz pisanje, stalni je Forex trgovac i prodavač Interneta.
Foto bodovi
Polka Dot RF / Polka Dot / Getty Images