Tehnike izolacije za niz ploča

Iako se ne mogu vidjeti golim okom, bakterija ima posvuda. Postoje u hrani, tlu, vodi, površinama unutar naših domova te u i na našim tijelima. Bakterije općenito postoje u mješovitim populacijama. Izolacija određene bakterije iz drugih vrsta bakterija u danom uzorku omogućava mikrobiolozima da prouče njezinu strukturu i funkciju, karakteristike korištene u njenoj identifikaciji. Mikrobiolozi često izoliraju bakterije koristeći jednu od nekoliko tehnika pločastih pločica.

Petlja za cijepljenje koristi se za prijenos mikroorganizama. Sastoji se od nikromove ili platinaste žice s malom kružnom petljom na jednom kraju. Drugi kraj je ravan i klizi u ručku. Dostupne su i plastične petlje za cijepljenje za jednokratnu upotrebu. Bakterije se mogu izolirati samo ako rastu. Mikrobiolozi uzgajaju bakterije za izolaciju pločastih pločica u plitkim, okruglim Petrijevim zdjelicama ispunjenim čvrstim medijem, zvanim agar. Agar oponaša okolinu u kojoj bakterije prirodno rastu. Posuđe s medijima sterilno je i poklopljeno kako bi se spriječio rast neželjenih organizama. Tijekom izolacije pločaste pločice, petlja za cijepljenje se više puta sterilizira u plamenu Bunsenovog plamenika.

Tehnika prugastih ploča najpopularnija je metoda za izoliranje specifičnih bakterija iz uzorka koji sadrži mješavinu mikroorganizama. Tehnika bitno razrjeđuje broj organizama i smanjuje njihovu gustoću. Omogućuje mikrobiolozima da razlikuju i izoliraju pojedine kolonije bakterija. Kolonija je vidljiva nakupina bakterija. Sve bakterije u jednoj koloniji potječu iz iste bakterijske stanice. Slijedom toga, pojedinačne kolonije su "čiste" kolonije. Čista kolonija prenosi se na drugu ploču kako bi se dobila čista kultura koja se sastoji od jedne vrste bakterija.

Kada se pravilno izvede, izolacija pločaste pločice razrjeđuje uzorak i omogućava pojedinim bakterijskim stanicama da se razviju u izolirane kolonije. Mikrobiolog započinje sterilizacijom petlje za cijepljenje u plamenu. Ona ohladi petlju dodirujući je agaru, a zatim umoči petlju u uzorak i širi je naprijed-natrag da pokrije dio ploče. Ona sterilizira petlju, ohladi je i povlačenjem inokulira drugi susjedni dio ploče petlju kroz prvi dio nekoliko puta i pokrivajući drugi dio cik-cak pokret. Ovo uzima mali broj bakterija iz prvog dijela i prebacuje ih u drugi dio. Broj ponavljanja ovog osnovnog postupka ovisi o korištenoj metodi pločastih pločica. Unatoč metodi, izvorni se uzorak koristi samo za cijepljenje prvog dijela ploče.

Metode pločastih pločica razlikuju se prema broju dijelova agara prošaranih prugama. Metoda T-pruga koristi tri dijela: gornju polovicu i dva jednako velika donja dijela. Početni inokulum stavlja se u gornju polovicu ploče. Bakterije se vuku s gornjeg dijela na jedan od donjih dijelova, a zatim s tog donjeg dijela na drugi. U metodi kvadranta, četiri jednako velika odjeljka su iscrtana. Metoda kontinuiranog crtanja obično uključuje cijepljenje gornje polovice ploče rotiranjem za 180 stupnjeva, i cijepljenje druge polovice ploče bez sterilizacije petlje ili povlačenja bakterija iz prethodne odjeljak.