TA kloniranje jednostavna je i prikladna metoda subkloniranja proizvoda lančane reakcije polimeraze (PCR). "TA" je kratica za "timin" i "adenin". Ova tehnika kloniranja koristi sposobnost timina da hibridizira u adenin u prisutnosti ligaza. Restrikcijski enzimi se ne koriste, za razliku od tradicionalne metode subkloniranja. Umjesto toga, PCR proizvodi se pojačavaju pomoću enzima Taq polimeraza.
Metoda
Metoda kloniranja TA koristi terminalnu aktivnost transferaze određenog prevjesa deoksiribonukleinske kiseline na svaki kraj PCR proizvoda.
Za kloniranje ovog PCR proizvoda u plazmidni vektor koristi se linearizirani vektor kloniranja s jednim, tri previsa T-3 (3'-T) nazvanim T-vektor. PCR proizvod je pomiješan s ovim vektorom u velikom udjelu.
Smjesi se dodaje DNA ligaza (T4 ligaza), koja omogućuje hibridizaciju i spajanje dvaju proizvoda.
Prednosti i nedostatci
TA kloniranje prikladna je metoda subkloniranja PCR proizvoda u lineariziranom vektoru, a mnogo je jednostavnija i brža od tradicionalnih metoda subkloniranja. Budući da se ovom metodom ne koriste restrikcijski enzimi, proizvodi koji nemaju mjesta restrikcijskih enzima mogu se klonirati.
Nedostatak je što su TA kompleti za kloniranje vrlo skupi i stoga je njihova upotreba ograničena. Osim toga, nema usmjerenog kloniranja; pa je vjerojatnost kloniranja u suprotnom smjeru veća.
TA kompleti za kloniranje
Nekoliko proizvođača prodaje TA komplete za kloniranje. Neki su Invitrogen, QIAGEN i Premier Biosoft.