Mikrobiologinja koristi hitinsko bojanje kako bi pod mikroskopom mogla jasno vidjeti gljivice. Gljivice koriste hitin kao strukturni materijal u svojim staničnim zidovima, tako da mrlja dobro pokazuje staničnu stijenku. Laktofenolna pamučna plava mrlja najčešća je mrlja kod gljivica. Fenol ubija mikroorganizme i sprječava gljivične enzime da razgrade stanicu. Pamučno plava boja postaje hitin plava. Bojenje hitinom relativno je jednostavan postupak s jeftinim materijalima. Možete napraviti vlastitu boju ili kupiti komercijalno pripremljenu mrlju.
Pripremite otopinu laktofenol pamučno plave boje. Izvažite 0,05 grama pamučnoplave boje pomoću osjetljive vage. Pomiješajte boju s 20 mililitara destilirane vode u epruveti i ostavite preko noći.
Stavite rukavice prije nego što završite s pripremom mrlja sljedeći dan. U čašu stavite 20 ml mliječne kiseline i pomiješajte je s 20 g kristala fenola. Miješajte dok se smjesa ne otopi. Dodajte 40 ml glicerola i promiješajte. Zatim procijedite pamučno plavu otopinu kroz komadić filter papira u čašu i temeljito promiješajte.
Ili upotrijebite komercijalno pripremljeni izvor mrlje. Čuvajte mrlju na sobnoj temperaturi.
Označite stakalce mikroskopa identifikacijskim imenom ili brojem uzorka. Upotrijebite jednu sterilnu kapaljku kako biste stavili jednu kapljicu uzorka vode na središte klizača mikroskopa. Za suhi uzorak stavite jednu kap 70-postotne otopine alkohola na tobogan, a zatim pomoću sterilne petlje umiješajte suhi uzorak u alkohol.
Čistom kapaljkom prenesite dvije kapi laktofenolne pamučnoplave mrlje na središte klizača. Ako na stakalcu upotrebljavate 70 posto alkohola, učinite to prije nego što alkohol ispari s klizača.
Dodirnite jedan rub kliznog poklopca mikroskopa na jedan rub mokrog pripravka uzorka. Neka klizač lagano padne na pripremu uzorka, osiguravajući da ispod stakla ne zarobite mjehuriće zraka. Obojeni uzorak sada je spreman za ispitivanje pod mikroskopom.