Bakterije se uzgajaju u Petrijevim zdjelicama na krutom mediju poznatom kao bakterijski agar, gdje nastaju uzgajane kružne kolonije. Za razliku od pojedine bakterijske stanice, kolonija je skupina bakterija koja je dovoljno velika da bude vidljiva golim okom. Rast bakterija može se izmjeriti jednostavnim promatranjem koliko je kolonija prisutno; međutim, više kvantitativnih metoda uključuje upotrebu komore za brojanje, ili češće, održivo brojanje ploča. Potonji se najčešće koristi jer također pruža kvalitativne informacije poput učinka različitih uvjeta rasta. Budući da se u petrijevki mogu nalaziti milijarde bakterija, prvo je potrebno mjerenje razrijediti uzorak tako da je moguće izbrojiti broj kolonija.
U epruvetu dodajte 10 mikrolitara početne bakterijske kulture u 90 mikrolitara medija za razrjeđivanje. Čvrsto zatvorite poklopac cijevi i lagano vrtložite da biste dobili homogenu smjesu. Sada je uzorak jedna desetina izvorne koncentracije.
Prenesite 10 mikrolitara ovog novog uzorka u novu epruvetu koja sadrži 90 mikrolitara medija za razrjeđivanje, pa ga ponovno promiješajte. Još jednom, rezultat će biti uzorak dodatno razrijeđen - sada će biti stoti dio svoje prvotne koncentracije. Ponovite to nekoliko puta dok se izvorni uzorak ne razrijedi između 10
4 i 1010 puta. Provjerite je li svaka epruveta označena ispravnim razrjeđenjem, na primjer 10-1, 10-2 i tako dalje.Na pločicu s agarom nanesite 10 mikrolitara zadnjeg razrijeđenog razrjeđenja. Pomoću ruba za širenje raspodijelite bakterijsku otopinu po cijeloj površini ploče s agarom. Ponovite ovo za još dvije ploče. Također je uobičajeno izvoditi ove korake s drugim razinama razrjeđenja radi usporedbe. Obavezno označite dno ploča. Vratite poklopce na svaku ploču i pustite da se ploče s agarom suše nekoliko minuta ili na laboratorijskoj klupi ispod plamena ili u inkubatoru. Stavite ploče u inkubator koji treba postaviti na temperaturu prikladnu za soj bakterija. Ostavite da raste 12 do 16 sati.
Kolonije bi trebale biti vidljive nakon 16 sati; međutim, neke genetske preinake mogu zahtijevati više vremena (na primjer, razvoj boje). Kad su kolonije vidljive, izvadite ploče i pronađite one koje imaju između 30 i 300 kolonija. Pomoću trajnog markera stavite točku na dno petrijevke - na stranu agara, a ne na poklopac - svugdje gdje je kroz agar vidljiva kolonija. Prebrojite svaku točku markera. Ponovite za svako jelo.
Da bi se izmjerila količina bakterija u početnoj kulturi za ovaj pokus, razrjeđivanje treba obrnuti u izračunima, na dva mjesta. Prvo, kad ste iz epruvete uzeli jedan mikroliter za stavljanje petrijeve zdjelice, uzeli ste desetinu razrijeđenog uzorka, pa sve morate pomnožiti s 10 da biste to preokrenuli. Uz to, ako je faktor razrjeđenja u epruveti bio, na primjer, 10-7, tada se broj kolonija mora pomnožiti s 107 kako bi se preokrenuo učinak razrjeđivanja. Jednostavno uklonite negativni predznak iz eksponenta u izračunima. Upotrijebite formulu:
[Broj izbrojanih kolonija] × 10 × [koliko puta se uzorak mora pomnožiti da bi se došlo do izvorne koncentracije: na primjer, 105] = Broj jedinica za stvaranje kolonija (CFU) po mililitru početne kulture. Ovo je rast bakterija u vašim Petrijevim zdjelicama.