Puferske otopine odolijevaju promjenama pH jer sadrže slabe kiselinsko-bazne konjugate koji neutraliziraju H + i OH- ione. Puferske otopine sastoje se od slabih kiselina ili baza i soli te kiseline ili baze. Odabir odgovarajućeg puferskog sustava ovisi o rasponu pH za puferiranje. Većina bioloških reakcija događa se u rasponu pH od 6 do 8. Fosfatni pufer puferira u rasponu pH od 6,5 do 7,5. Puferi karboksilne kiseline korisni su od pH 3 do 6. Boratni puferi funkcioniraju od pH 8,5 do 10. Puferi aminokiselina poput glicina i histidina djeluju u različitim rasponima pH. Tris pufer jedan je od najčešće korištenih puferskih sustava u biološkim laboratorijima. Izračuni za Tris otopinu pufera koristit će se u sljedećem primjeru, ali metodologija se odnosi na bilo koju otopinu pufera.
Koristite umnožak i volumen konačne otopine za određivanje potrebnih molova baze. Na primjer, ako su potrebne 2 litre 0,1 M otopine Tris pufera, potreban broj molova Trisa je:
Izračunajte potrebnu masu pufera množenjem broja molova potrebnih molekulskom težinom baze. Na primjer, masa 0,2 mola Tris baze jednaka je:
Otopite bazu u destiliranoj vodi pomoću magnetske miješalice i vruće ploče. Otopiti ga u količini vode tek nešto manje od konačne zapremine otopine (950 do 975 ml za svaku litru konačne otopine). PH Tris pufera mijenja se s koncentracijom i treba ga prilagoditi ako se koristi premali početni volumen. Također je najbolje pripremiti pufer na istoj temperaturi koja će se koristiti tijekom pokusa ili eksperimenta jer Tris ima velike promjene pH vrijednosti ovisne o temperaturi.
Savjeti
- Da biste uštedjeli vrijeme prilikom pripreme puferske otopine, možete koristiti prethodno izrađene puferske koncentrate pri potrebnom pH i razrijediti za željenu molarnost i volumen. Pripremite pufersku otopinu na istoj temperaturi na kojoj će se koristiti kako bi se izbjegle značajne promjene pH. Izbjegavajte dugotrajna podešavanja pH, titrirajte tek nakon razrjeđivanja do željene koncentracije. Otapanje u premalom volumenu dovesti će do ponovljenih titracija.
Upozorenja
- Budite oprezni pri rukovanju kiselinama i bazama. Nosite zaštitne naočale.
o autoru
Carla Boulianne evolucijska je biologinja po struci i slobodna spisateljica po strasti. Osim što je pisala za Demand Studios i eHow, autorica je filmova Roditeljstvo nadarenog djeteta na Suite101.com. Oduševljena je istraživanjem novih tema kroz opsežna istraživanja.
Foto bodovi
Fotografija ljubaznošću Emmi P. @ morgueFile.com