Kada testirate učinak pH na aktivnost enzima, trebali biste mijenjati pH. Međutim, to možete učiniti na dobre ili loše načine. Imajte na umu koji dodatni čimbenici mogu pomutiti učinke različitog pH. Inače, dobiveni rezultati možda nisu posljedica promjene pH, već nekog drugog čimbenika. Znanje kako pravilno mijenjati pH i koji čimbenici zbunjuju pH eksperimenta pomoći će vam da postignete dobre rezultate i shvatite zašto vaši rezultati možda nisu baš ono što ste očekivali.
Promijenite samo jednu stvar
Pri ispitivanju učinka pH na aktivnost enzima, varirajte samo pH, a ostale čimbenike održavajte konstantnima. Ovi drugi čimbenici uključuju koncentraciju enzima, koncentraciju supstrata i temperaturu. Čimbenici koji ostaju konstantni nazivaju se kontrolne varijable. Kontrolne varijable omogućuju vam zaključak da su rezultati aktivnosti enzima dobiveni u vašem eksperimentu posljedica promjenjivog pH-a, neovisne varijable. Znati koje čimbenike ne treba mijenjati u eksperimentu jednako je važno kao i znati koji čimbenik varirati, inače će biti teško zaključiti jesu li rezultati zapravo posljedica jedne stvari koja je bila testirano.
Odaberite jednu kiselinu ili jednu bazu
PH otopine može se promijeniti otapanjem različitih količina kiseline ili baze u vodi. Jedan od načina za ispitivanje učinka pH na aktivnost enzima je postupno dodavanje kapi jake kiseline ili jake baze u otopinu koja sadrži enzim, a zatim promatrajte točku u kojoj se aktivnost enzima usporava ili zaustavlja. Kiselina je definirana kao spoj koji donira vodikov ion, nazvan proton (H +), a baza je definirana kao spoj koji donira hidroksidni ion (-OH). Različite kiseline i baze imaju različit broj protona ili hidroksidnih iona koji se daju. Ne donose se svi protoni ili hidroksidni ioni odmah kada se otopini doda kiselina ili baza, ali broj doniranih protona ili hidroksidnih iona mijenja pH različitim brzinama. Stoga je dobra ideja mijenjati pH u eksperimentu s enzimima koristeći samo jednu vrstu kiseline ili jednu vrstu baze. Inače, druge se varijable nenamjerno dodaju.
Tkiva također mijenjaju pH
Neki laboratorijski eksperimenti koji proučavaju aktivnost enzima uključuju mljevenje svježeg tkiva radi oslobađanja enzima iz stanica, a zatim dodavanje supstrata za mjerenje enzimske aktivnosti. Svježe tkivo sadrži krv. Zbog prisutnosti enzima u krvi koji mijenjaju plin ugljični dioksid koji se otapa u krvi u ugljičnu kiselinu, samo tkivo može utjecati na pH. Stoga je u eksperimentima koji uključuju aktivnost enzima u svježem tkivu korisno isprati krv u čaši hladne vode prije mljevenja tkiva. To će smanjiti nenamjernu promjenu pH zbog tkiva, tako da se može proučavati svrhovita promjena pH.
Neka veličine budu iste
Kao što je gore spomenuto, koncentracija enzima je kontrolni faktor koji se ne smije mijenjati pri ispitivanju učinka pH na aktivnost enzima. Međutim, eksperimentalni postupci još uvijek u osnovi variraju koncentraciju enzima na suptilne načine. Ako se koristi čista otopina enzima, održavanje koncentracije enzima konstantno. Međutim, u eksperimentima u kojima je enzim iz svježeg tkiva, poput komadića krumpira, komadića biljaka ili komadića jetre, veličina komada mijenja količinu enzima u svakoj epruveti. Stoga će biti korisno izrezati komade tkiva što je moguće ujednačenije. Ovo je još jedan primjer kako znajući što ne treba mijenjati i zašto je teško ne izbjeći promjenu u potpunosti, pomaže u tumačenju rezultata variranja čimbenika kao što je pH.