वेस्टर्न ब्लॉट के फायदे और नुकसान

वेस्टर्न ब्लॉट, किसी दिए गए नमूने में एक विशिष्ट प्रोटीन को इंगित करने के लिए उपयोग की जाने वाली एक विश्लेषणात्मक तकनीक, एंजाइम या फ्लोरोसेंस-लेबल वाले प्राथमिक एंटीबॉडी की क्षमता को अपने विशिष्ट एंटीजन से बांधने की क्षमता को नियोजित करती है। यह जेल वैद्युतकणसंचलन से शुरू होने वाली तीन-चरणीय प्रक्रिया है, इसके बाद झिल्ली को सोखने और एंटीबॉडी के साथ जांच की जाती है। प्रोटीन का पता लगाना प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष हो सकता है, बाद में प्राथमिक के खिलाफ निर्देशित एक लेबल माध्यमिक एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है। हालांकि एक नियमित प्रोटीन विश्लेषण तकनीक के रूप में स्वीकार किया जाता है, पश्चिमी धब्बा की सीमाएं और साथ ही लाभ भी हैं।

पश्चिमी धब्बा के पक्ष में सबसे बड़ा तर्क इसकी संवेदनशीलता है। एक नमूने में कम से कम 0.1 नैनोग्राम प्रोटीन का पता लगाने की क्षमता के कारण, तकनीक सैद्धांतिक रूप से काम कर सकती है एक प्रभावी प्रारंभिक निदान उपकरण, एक मरीज में वायरस या बैक्टीरिया से थोड़ी सी भी प्रतिरक्षात्मक प्रतिक्रिया को महसूस करना नमूना। एक अप्रत्यक्ष पश्चिमी धब्बा आगे इस संवेदनशीलता पर द्वितीयक एंटीबॉडी की इमेजिंग सिस्टम द्वारा पता लगाए गए संकेत की तीव्रता को बढ़ाने की क्षमता का निर्माण करता है। अधिक संवेदनशीलता का मतलब है कि परीक्षण के लिए कम एंटीबॉडी की आवश्यकता होती है, जिससे प्रयोगशाला लागत में काफी कमी आती है।

पश्चिमी धब्बा तकनीक दो बड़े योगदान कारकों के लिए अपनी विशिष्टता का श्रेय देती है। सबसे पहले, जेल वैद्युतकणसंचलन विभिन्न आकार, आवेश और संरचना के प्रोटीन में एक नमूना सॉर्ट करता है। यह प्रक्रिया अपने आप में पता लगाने की दिशा में एक बड़ा कदम है, क्योंकि जेल में बनने वाले बैंड पहले से ही प्रोटीन के आकार या रुचि के पॉलीपेप्टाइड के बारे में सुराग देते हैं। एंटीबॉडी-एंटीजन इंटरैक्शन की विशिष्टता दूसरे बड़े कारक के रूप में कार्य करती है। क्योंकि विशिष्ट एंटीबॉडी विशिष्ट प्रोटीन के लिए आत्मीयता दिखाते हैं, प्रक्रिया चुनिंदा रूप से 300,000 विभिन्न प्रोटीनों के मिश्रण में भी लक्ष्य प्रोटीन का पता लगा सकती है।

अपनी संवेदनशीलता और विशिष्टता के बावजूद, एक पश्चिमी धब्बा अभी भी गलत परिणाम दे सकता है। एक गलत-सकारात्मक परिणाम जब एक एंटीबॉडी एक गैर-इच्छित प्रोटीन के साथ प्रतिक्रिया करता है, जो कि अक्सर होता है ऐसा तब होता है जब एचआईवी के लिए परीक्षण किए जा रहे रोगी को तपेदिक या कई परजीवी होते हैं संक्रमण। दूसरी ओर, एक गलत-नकारात्मक परिणाम आसानी से हो सकता है यदि बड़े प्रोटीन को झिल्ली में ठीक से स्थानांतरित करने के लिए पर्याप्त समय नहीं दिया जाता है। अनुचित ब्लोटिंग और प्रसंस्करण अक्सर तिरछी, फीकी, या यहां तक ​​कि कई बैंड उत्पन्न करते हैं, जिससे परीक्षा परिणाम तकनीशियन की व्याख्या के अधीन हो जाते हैं।

एक पश्चिमी धब्बा की लागत टैग किए गए एंटीबॉडी, कुशल विश्लेषकों और प्रयोगशाला उपकरणों के लिए बड़े व्यक्तिगत व्यय का एक संयोजन है। एक नाजुक प्रक्रिया, पश्चिमी सोख्ता के लिए नमूने के घटकों की उचित पहचान के लिए हर चरण में सटीकता की आवश्यकता होती है। अभिकर्मक एकाग्रता या ऊष्मायन अवधि में एक छोटी सी त्रुटि पूरी प्रक्रिया के लिए विनाशकारी हो सकती है। अंत में, पता लगाने और इमेजिंग के लिए आवश्यक उपकरण - केमिलुमिनसेंट, फ्लोरोसेंट, रेडियोधर्मी, या लेजर डिटेक्शन सिस्टम - औसत सूक्ष्म जीव विज्ञान इकाई के लिए बहुत महंगा हो सकता है।