डीएनए निष्कर्षण में ट्रिस बफर का कार्य क्या है?

ट्रिस, या ट्रिस (हाइड्रॉक्सीमेथाइल) एमिनोमेथेन, एक सामान्य जैविक बफर है, जिसका उपयोग डीएनए निष्कर्षण प्रक्रिया के दौरान किया जाता है। किसी भी स्रोत से निष्कर्षण के दौरान, डीएनए पीएच संवेदनशील होता है। सेल विश्लेषण के दौरान, अवांछित सेलुलर घटकों और वर्षा को हटाने के दौरान, स्थिर पीएच बनाए रखने के लिए ट्रिस का उपयोग किया जाता है। इसके अतिरिक्त, यह सेल लिसिस में विशेष रूप से महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है।

टीएल; डीआर (बहुत लंबा; पढ़ा नहीं)

डीएनए निष्कर्षण एक पीएच-संवेदनशील प्रक्रिया है, और ट्रिस बफर का उपयोग करने से सेल लिसिस और निष्कर्षण पर पीएच को स्थिर रखने में मदद मिलती है।

चूंकि पीएच कई सेलुलर कारकों को प्रभावित और प्रभावित कर सकता है, इसलिए प्रयोगात्मक विज्ञान के लिए स्थिर पीएच बनाए रखना आवश्यक है। ट्रिस जैसे जैविक बफर महत्वपूर्ण हैं क्योंकि वे पीएच को अन्यथा स्थानांतरित करने वाले प्रभावों के बावजूद एक स्थिर पीएच बनाए रख सकते हैं। ट्रिस (हाइड्रॉक्सीमेथाइल) एमिनोमेथेन, 8.1 के पीकेए के साथ, पीएच 7 और 9 के बीच एक प्रभावी बफर है। इसकी तटस्थ सीमा के कारण, ट्रिस जैविक प्रयोगशालाओं में आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला बफर है। हालांकि, ट्रिस बफर तापमान के प्रति संवेदनशील होता है और अशुद्धि से बचने के लिए इसका उपयोग उस तापमान पर किया जाना चाहिए जिस पर इसे मूल रूप से पीएच किया गया था।

Lysis, या कोशिकाओं को तोड़ना, डीएनए निष्कर्षण का पहला चरण है। यह ट्रिस और ईडीटीए (एथिलीनडायमिनेटेट्राएसेटिक एसिड) युक्त बफर द्वारा पूरा किया जाता है। EDTA कैल्शियम और मैग्नीशियम जैसे द्विसंयोजक उद्धरणों को बांधता है। चूंकि ये आयन कोशिका झिल्ली की अखंडता को बनाए रखने में मदद करते हैं, इसलिए उन्हें EDTA के साथ समाप्त करने से झिल्ली अस्थिर हो जाती है। Tris मुख्य बफरिंग घटक है; इसकी मुख्य भूमिका बफर के पीएच को स्थिर बिंदु पर बनाए रखना है, आमतौर पर 8.0। इसके अतिरिक्त, त्रिशूल संभावित रूप से झिल्ली में एलपीएस (लिपोपॉलीसेकेराइड) के साथ संपर्क करता है, झिल्ली को अस्थिर करने के लिए कार्य करता है आगे की।

जब कोशिकाएं अलग हो जाती हैं, तो उनका डीएनए और सामग्री बफर में फैल जाती है। इसके अतिरिक्त, RNase A (RNA को नष्ट करता है), प्रोटीज (प्रोटीन को नष्ट करता है), और SDS (सोडियम डोडेसिल सल्फेट, झिल्ली के टुकड़ों को घोलता है) को अक्सर शामिल किया जाता है। एक साथ लिया गया, सेलुलर सामग्री और खंडित आरएनए और प्रोटीन का यह सूप समाधान के पीएच पर एक बड़ा प्रभाव डाल सकता है। चूंकि डीएनए पीएच संवेदनशील है, इसलिए ट्रिस के लिए सूप को बफर करना और पीएच को स्थिर बिंदु पर बनाए रखना महत्वपूर्ण है।

डीएनए निष्कर्षण के अंतिम चरण में, डीएनए को ही घोल से निकाला जाता है। इस बिंदु पर, डीएनए बफर में घुलनशील है। घोल से निकालने के लिए इथेनॉल या आइसोप्रोपेनॉल (आइसोप्रोपाइल अल्कोहल) मिलाकर डीएनए को अघुलनशील बनाया जाता है। जब यह किया जाता है, तो डीएनए एक सफेद धागे वाले पदार्थ के रूप में घोल में स्पष्ट हो जाता है। हालांकि डीएनए को इस तरह से शेष सेलुलर घटकों से अलग किया जा सकता है, यह अघुलनशील होने पर "प्रयोग योग्य" नहीं है। अलगाव के बाद, अल्कोहल हटा दिया जाता है, और डीएनए को जैविक बफर में वापस किया जाना चाहिए, जैसे ट्रिस, का उपयोग किया जाना चाहिए।

हालांकि डीएनए का निष्कर्षण आमतौर पर अनुसंधान प्रयोगशालाओं में किया जाता है, आमतौर पर इनमें से कई में से एक का उपयोग किया जाता है व्यावसायिक रूप से उपलब्ध किट, कोई भी सामान्य घरेलू सामान और हरे रंग का उपयोग करके घर पर डीएनए निष्कर्षण कर सकता है मटर या पालक। इस मामले में, डीएनए को पीएच शिफ्ट से बचाने के लिए ट्रिस और न ही कोई जैविक बफर मौजूद नहीं है। हालांकि, यह छात्रों को सेलुलर डीएनए से जुड़ने में मदद करने का एक दृश्य तरीका है।