जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके डीएनए की कल्पना कैसे की जाती है?

जेल वैद्युतकणसंचलन एक ऐसी तकनीक है जो डीएनए को उसके घटक अणुओं के स्तर पर विश्लेषण करने की अनुमति देती है। इस डीएनए विज़ुअलाइज़ेशन विधि में, नमूने एक agarose जेल माध्यम पर रखे जाते हैं और जेल पर एक विद्युत क्षेत्र लगाया जाता है। यह डीएनए के टुकड़ों को उनके विद्युत रासायनिक गुणों के अनुसार अलग-अलग दरों पर जेल के माध्यम से स्थानांतरित करने का कारण बनता है।

इस विज़ुअलाइज़ेशन तकनीक के लिए, इलेक्ट्रोफोरेसिस से पहले जेल मैट्रिक्स बनाने के लिए एथिडियम ब्रोमाइड को agarose पाउडर, EDTA बफर और पानी के साथ मिलाया जाता है। नतीजतन, एथिडियम ब्रोमाइड अणु पूरे मैट्रिक्स में समान रूप से फैल जाते हैं। एक बार जब जेल के कुओं को उनके संबंधित डीएनए नमूनों और ट्रैकिंग रंगों से भर दिया जाता है, तो मैट्रिक्स में बड़े, ध्रुवीय यौगिकों को धीरे-धीरे खींचने के लिए वोल्टेज लागू किया जाता है।

इस आंदोलन के दौरान, डीएनए अणुओं के आधार अस्थायी रूप से एथिडियम ब्रोमाइड चार्ज के कारण कणों से बंधे होते हैं, उन्हें साथ खींचते हैं। जब तक जेल वैद्युतकणसंचलन पूरा हो जाता है, तब तक प्रत्येक डीएनए अणु ने एथिडियम ब्रोमाइड की महत्वपूर्ण मात्रा में उठाया है।

पराबैंगनी प्रकाश की उपस्थिति में, एथिडियम ब्रोमाइड प्रतिदीप्ति प्रदर्शित करता है। तकनीशियन पूरे जेल में एक विशेष रूप से कैलिब्रेटेड यूवी प्रकाश चमकते हैं जबकि एक मशीन चमकते हुए टुकड़ों की तस्वीर को कैप्चर करती है।

यदि यूवी ट्रांसिल्यूमिनेटर उपलब्ध नहीं है या व्यावहारिक नहीं है, तो तकनीशियन डीएनए को सामान्य स्थिति में दृश्यमान बना सकते हैं तैयार agarose जेल को अंदर वैद्युतकणसंचलन डीएनए के साथ, मेथिलीन ब्लू के घोल में रात भर भिगोकर।

एक महत्वपूर्ण हाइड्रोफोबिक आयन के साथ क्लोराइड नमक, मिथाइलीन नीले अणु पूरे जेल मैट्रिक्स में प्रवेश करते हैं। हालांकि, पूरे डीएनए में हाइड्रोजन बॉन्डिंग के कारण दाग के अणु जमा हो जाते हैं। यह बढ़ी हुई डीएनए दाग घनत्व नग्न आंखों को दिखाई देने वाली नीली रंग की गहरी छाया उत्पन्न करती है।

डीएनए बैंड के सापेक्ष आकार से परे, तकनीशियन ट्रैकिंग डाई नामक रसायनों का उपयोग करके प्रत्येक टुकड़े के पूर्ण आकार (आधार-जोड़े में) को माप सकते हैं। मेथिलीन ब्लू या एथिडियम ब्रोमाइड को मिलाए बिना दिखाई देता है, ब्रोमोफेनॉल ब्लू और जाइलीन साइनॉल जैसे ट्रैकिंग डाई पूरे क्षेत्र में चले जाते हैं वैद्युतकणसंचलन के दौरान एरागोस जेल मैट्रिसेस उसी गति से होता है जैसे डीएनए के टुकड़े जिसमें 300 न्यूक्लियोटाइड और 4,000 न्यूक्लियोटाइड होते हैं, क्रमशः। वैद्युतकणसंचलन में, अधिक बड़े डीएनए टुकड़े छोटे टुकड़ों की तुलना में धीमी गति से जेल मैट्रिक्स में यात्रा करते हैं। इसलिए, ट्रैकिंग डाई डीएनए टुकड़े की स्थिति की तुलना करते हुए, डीएनए अंशों की दृश्यता को सीधे प्रभावित नहीं करते हैं जेल में इन रंगों की स्थिति के लिए तकनीशियनों को डीएनए के टुकड़े के न्यूक्लियोटाइड की अनुमानित संख्या को "देखने" की अनुमति मिलती है शामिल है।