माइक्रोबायोलॉजी में कॉलोनियों की गणना कैसे करें

एक नमूने में रोगाणुओं की एकाग्रता को निर्धारित करने के क्लासिक तरीकों में से एक नमूना को पतला करना, प्लेटों पर रोगाणुओं को विकसित करना और कॉलोनियों की गणना करना है। मढ़वाया रोगाणु एक कॉलोनी बनाने वाली इकाई से एक या एक से अधिक कोशिकाओं से मिलकर एक दृश्य कॉलोनी में विकसित होते हैं जिन्हें देखा और गिना जा सकता है। प्लेट काउंट का उपयोग करके आकलन करने के लिए बैक्टीरिया सबसे आम सूक्ष्म जीव हैं। मिट्टी, पानी और भोजन में रोगाणुओं का पता लगाने और गिनने के लिए कॉलोनी काउंट का उपयोग किया जाता है। कालोनियों की गिनती के लिए प्रोटोकॉल एक सटीक और व्यवस्थित दृष्टिकोण पर जोर देते हैं।

यदि आप बस एक अग्र प्लेट पर एक सूक्ष्म जीव के नमूने को धब्बा देते हैं, तो आप इतनी सारी कॉलोनी बनाने वाली इकाइयाँ देखेंगे कि अलग-अलग कॉलोनियाँ एक साथ मिल जाएँगी, जिससे उनकी गिनती करना असंभव हो जाएगा। इस समस्या को हल करने के लिए, नमूने को एक तरल माध्यम में मिलाएं, उस मिश्रण की थोड़ी मात्रा लें और इसे और पतला करें। इस प्रक्रिया को छह से 10 बार दोहराएं। अंतिम तनुकरण को आगर प्लेट पर फैलाएं और कॉलोनियों को गिनने से पहले चार से सात दिनों के लिए इसे सेते हैं।

कॉलोनियों की गिनती में प्राथमिक चाल प्रत्येक कॉलोनी डॉट को एक बार गिनना है। एक दृष्टिकोण पेट्री डिश को ग्रिड पृष्ठभूमि पर सेट करना और प्रत्येक ग्रिड सेल में कॉलोनियों की गणना करना है, सभी कक्षों के माध्यम से एक व्यवस्थित पैटर्न में आगे बढ़ना। पेट्री डिश के पीछे गिने हुए कॉलोनियों को चिह्नित करना भी एक सहायक तरीका हो सकता है। आम तौर पर, आपको कम से कम तीन प्लेट गिनने की आवश्यकता होगी; प्रयोगशालाओं और निर्माताओं को परामर्श सेवाएं प्रदान करने वाली एक फर्म माइक्रोबायोलॉजी नेटवर्क का सुझाव है कि मजबूत निष्कर्ष निकालने के लिए केवल 30 से 300 कॉलोनियों वाली प्लेटों का उपयोग करें। कॉलोनियों वाली प्लेटें जो गिनने के लिए बहुत अधिक हैं या बहुत कम कॉलोनियों के साथ एक नए कमजोर पड़ने से फिर से चढ़ाने की आवश्यकता है।

कालोनियों को मैन्युअल रूप से गिनने में शामिल समय में मानवीय त्रुटि जुड़ जाती है। सटीकता और दक्षता दोनों में सुधार करने के लिए, पेट्री डिश को एक स्वचालित कॉलोनी काउंटिंग डिवाइस में रखें। स्वचालित कॉलोनी काउंटर डिश की एक छवि लेते हैं, कॉलोनियों को पृष्ठभूमि से अलग करते हैं और फिर प्लेट पर कॉलोनियों की गणना करने के लिए एक एल्गोरिथ्म का उपयोग करते हैं। एल्गोरिदम को कॉलोनियों को अलग करने में कठिनाई हो सकती है जब दो या दो से अधिक कॉलोनियां किनारों पर छू रही हों, इसलिए यह चल रहे सॉफ़्टवेयर विकास का एक क्षेत्र है।

कॉलोनी की गिनती से सूक्ष्म जीव घनत्व की गणना की सटीकता की कुछ सीमाएँ हैं। कॉलोनी बनाने वाली इकाइयाँ एकल कोशिका, कोशिकाओं की एक श्रृंखला या कोशिकाओं का एक पूरा समूह हो सकती हैं। धारणा यह है कि एक कॉलोनी एक सेल का प्रतिनिधित्व करती है, इसलिए कॉलोनी की गणना से गणना की गई सांद्रता कम हो सकती है। विभिन्न रोगाणुओं को अलग-अलग विकास स्थितियों की आवश्यकता होती है, और प्लेट पर उपनिवेश केवल उन रोगाणुओं का प्रतिनिधित्व करते हैं जो उन ऊष्मायन स्थितियों के तहत उस विकास मीडिया पर पनपते हैं। इसके अलावा, कॉलोनी-गिनती मृत कोशिकाओं को पंजीकृत नहीं करती है, एक महत्वपूर्ण विचार जब आपको मूल नमूने में कोशिकाओं की एकाग्रता की आवश्यकता होती है।