बफर समाधान पीएच में परिवर्तन का विरोध करते हैं क्योंकि उनमें कमजोर एसिड-बेस संयुग्म होते हैं जो एच + और ओएच-आयनों को बेअसर करते हैं। बफर सॉल्यूशन में कमजोर एसिड या बेस और उस एसिड या बेस के नमक होते हैं। एक उपयुक्त बफर सिस्टम का चयन बफरिंग के लिए पीएच रेंज पर निर्भर करता है। अधिकांश जैविक प्रतिक्रियाएं 6 से 8 के पीएच रेंज में होती हैं। 6.5 से 7.5 के पीएच रेंज पर फॉस्फेट बफर बफर। कार्बोक्जिलिक एसिड बफर पीएच 3 से 6 तक उपयोगी होते हैं। बोरेट बफर पीएच ८.५ से १० तक कार्य करते हैं। अमीनो एसिड बफ़र्स जैसे ग्लाइसिन और हिस्टिडाइन पीएच श्रेणियों की विविधता पर प्रदर्शन करते हैं। ट्रिस बफर जीव विज्ञान प्रयोगशालाओं में सबसे अधिक इस्तेमाल किए जाने वाले बफर सिस्टम में से एक है। ट्रिस बफर समाधान के लिए गणना का उपयोग निम्नलिखित उदाहरण में किया जाएगा, लेकिन कार्यप्रणाली किसी भी बफर समाधान पर लागू होती है।
आवश्यक आधार के मोल्स निर्धारित करने के लिए अंतिम समाधान मोलरिटी और वॉल्यूम के उत्पाद का उपयोग करें। उदाहरण के लिए, यदि ट्रिस बफर के 0.1 एम घोल के 2 लीटर की आवश्यकता है, तो ट्रिस के मोल की संख्या की आवश्यकता होगी:
आधार के आणविक भार के लिए आवश्यक मोलों की संख्या को गुणा करके आवश्यक बफर के द्रव्यमान की गणना करें। उदाहरण के लिए, ट्रिस बेस के 0.2 मोल का द्रव्यमान बराबर होता है:
एक चुंबकीय स्टिर बार का उपयोग करके और गर्म प्लेट को हिलाते हुए आसुत जल में बेस को घोलें। इसे अंतिम घोल की मात्रा से थोड़ा ही कम पानी की मात्रा में घोलें (अंतिम घोल के प्रत्येक लीटर के लिए 950 से 975 एमएल)। ट्रिस बफर का पीएच एकाग्रता के साथ बदलता है और यदि बहुत कम प्रारंभिक मात्रा का उपयोग किया जाता है तो इसे पुनः समायोजन की आवश्यकता होती है। बफर को उसी तापमान पर तैयार करना भी सबसे अच्छा है जिसका उपयोग परख या प्रयोग के दौरान किया जाएगा क्योंकि ट्रिस में पीएच में बड़े तापमान पर निर्भर परिवर्तन होते हैं।
टिप्स
- बफर सॉल्यूशन तैयार करते समय समय बचाने के लिए, आप आवश्यक पीएच पर प्रीमेड बफर कॉन्संट्रेट्स का उपयोग कर सकते हैं और वांछित मोलरिटी और वॉल्यूम के लिए पतला कर सकते हैं। एक ही तापमान पर बफर समाधान तैयार करें इसका उपयोग महत्वपूर्ण पीएच परिवर्तनों से बचने के लिए किया जाएगा। समय लेने वाले पीएच समायोजन से बचें, वांछित एकाग्रता को पतला करने के बाद ही अनुमापन करें। बहुत कम मात्रा में घुलने से बार-बार अनुमापन होता है।
चेतावनी
- एसिड और बेस को संभालते समय सावधानी बरतें। सुरक्षात्मक चश्मा पहनें।
लेखक के बारे में
कार्ला बौलियन प्रशिक्षण द्वारा एक विकासवादी जीवविज्ञानी और जुनून से स्वतंत्र लेखक हैं। डिमांड स्टूडियो और eHow के लिए लिखने के अलावा, वह Suite101.com पर पेरेंटिंग ए गिफ्टेड चाइल्ड के लिए फीचर राइटर हैं। वह व्यापक शोध के माध्यम से नए विषयों की खोज में रोमांचित है।
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