L'électrophorèse sur gel est une méthode utilisée dans les laboratoires pour séparer ADN (acide désoxyribonucléique). Il peut également être utilisé pour séparer l'ARN et les protéines.
La lecture des résultats de l'électrophorèse sur gel permet aux chercheurs de déterminer la taille des brins dans un échantillon. Pour comprendre comment fonctionne le processus, il faut d'abord apprendre la définition de l'électrophorèse sur gel.
Définition de l'électrophorèse sur gel
L'électrophorèse sur gel est un outil puissant utilisé dans biologie moléculaire pour déterminer la taille et la charge électrique de l'ADN, de l'ARN et des protéines. Vous commencez par utiliser des morceaux d'ADN qui ont été digérés par des enzymes à partir d'un brin d'ADN plus large.
En utilisant l'intensité de la bande d'électrophorèse sur gel comme résultats, vous pouvez déterminer la taille des fragments. On peut alors obtenir un empreinte ADN.
Comme le révèle la partie « électro » du mot, un définition de l'électrophorèse sur gel
implique l'utilisation d'un champ électrique. Une machine spéciale est utilisée qui contient une solution tampon qui recouvre les électrodes, un puits pour le gel à suspendre à l'intérieur et les électrodes elles-mêmes.Le gel en électrophorèse sur gel
Électrophorèse sur gel nécessite l'utilisation d'un gel formé en une plaque généralement constituée d'une version purifiée d'agar à partir d'algues appelée agarose.
Gels d'agarose faire une matrice poreuse à travers laquelle des molécules chargées de différentes tailles peuvent voyager à différentes vitesses. Un produit chimique appelé bromure d'éthidium (EtBr) est ajouté à la solution de gel avant de la verser dans un moule.
Si vous avez de très petites molécules d'ADN ou de protéines à séparer, vous devrez peut-être utiliser un gel de polyacrylamide au lieu d'agarose. Faites attention lorsque vous utilisez du polyacrylamide, car il est neurotoxique.
Un peigne spécial est placé dans le moule en gel d'agarose, puis soigneusement retiré après sa solidification. C'est là que le fragment d'ADN ou d'autres échantillons moléculaires sont placés, ayant d'abord été mélangés avec un colorant de charge spécial. le colorant de chargement est juste de suivre le mouvement de l'ADN, car il n'est pas visible autrement.
Il y a aussi un puits qui contient ce qu'on appelle un échelle d'ADN ou marqueur. Cela sert de modèle de haute qualité avec des tailles de bande connues, pour une comparaison de taille avec les échantillons d'ADN étudiés. Une fois le champ électrique appliqué, ces molécules chargées négativement traverseront le gel vers l'extrémité positive.
Résultats de l'électrophorèse sur gel
Une fois que les molécules ont voyagé jusqu'au bout du gel, il est temps de lire résultats de l'électrophorèse sur gel. Le colorant EtBr dans le gel se lie facilement à l'ADN, d'où son utilisation, et vous pouvez alors voir des bandes d'ADN fluorescentes sous la lumière UV.
Vous devez faire très attention à ne pas toucher le bromure d'éthidium, car son affinité pour l'ADN signifie également qu'il peut le dérouler; il est donc considéré comme un mutagène. Des colorants plus récents et plus sûrs sont maintenant disponibles, bien que leurs prix soient plus élevés.
La lumière UV révèle l'intensité de la bande d'électrophorèse sur gel de l'ADN ou d'autres échantillons moléculaires. L'emplacement des bandes sur un gel révèle la taille de la fragment d'ADN. le intensité de la bande d'électrophorèse sur gel révèle la concentration de la molécule.
Vous pouvez maintenant comparer les bandes d'ADN de vos échantillons à l'échantillon de l'échelle d'ADN. Les tailles de bande connues de l'échelle vous aideront à déterminer la taille relative de l'ADN que vous étudiez.
L'importance d'une électrophorèse sur gel de qualité
L'électrophorèse sur gel a été utilisée dans Empreintes génétiques et médecine légale. Il a aidé les chercheurs à déterminer des informations sur les génomes de nombreuses espèces. L'utilisation de résultats d'électrophorèse sur gel de haute qualité est essentielle pour ces domaines importants.
Il est donc crucial de travailler avec des ingrédients de haute qualité et d'apporter le plus grand soin à la fabrication des gels. Il est essentiel d'éviter la contamination des échantillons d'ADN par de l'ARN ou des protéines.
Assurez-vous d'utiliser un tampon propre, versez le gel avec précaution afin que ses puits de peigne soient uniformément formés et maintenez tous les réactifs à la bonne température. Électrophorèse sur gel L'intensité de la bande doit être vive et propre, sans traces d'autre ADN en arrière-plan, et sans frottis d'ARN ou de protéines polluant le gel.