Les scientifiques utilisent la cytométrie en flux pour différencier différents types de cellules ou d'organismes microscopiques. C'est un outil utilisé dans de nombreuses applications telles que le diagnostic médical ou la médecine légale. Bien que cette technique expérimentale soit assez facile à réaliser, l'analyse des données complexes produites par le cytomètre en flux est plus difficile en raison des multiples facteurs expérimentaux et/ou du cytomètre paramètres. En tant que tel, il est courant que les données cytométriques soient visualisées et analysées à l'aide de programmes professionnels sophistiqués tels que CELLQuest ou FlowJo. Une connaissance des techniques, des machines et des logiciels de cytométrie en flux est nécessaire pour comprendre les résultats produits par ces expériences.
Clarifiez le but de l'expérience en demandant: « Quelle était la question ou l'hypothèse étudiée? » Ce sera nécessaire pour ajuster les résultats bruts au format et aux paramètres appropriés pour une analyse plus approfondie à l'aide de la cytométrie statistique Logiciel. Apportez les modifications nécessaires pour que les données soient affichées avec les paramètres appropriés (par exemple, cellules positives, portes négatives, intensité de fluorescence, populations cellulaires, etc.).
Trouvez des portes. Les cellules peuvent être regroupées ou simplement observées regroupées sur un graphique de densité ou un diagramme de contour. Les groupes se séparent souvent en fonction de leur identité. Si un groupe se colore très intensément pour un marqueur ou un anticorps particulier, il est conclu que les membres de ce groupe ont tous l'identité du type cellulaire spécifique, qui exprime ce marqueur. Il est courant de trouver des cellules positives pour plus d'un de ces marqueurs, et ces cellules sont généralement un intermédiaire et désignées comme « double-positives ».
Regardez les nuages de points. La façon dont les groupes de cellules se répartissent dans un nuage de points est une indication de la taille des cellules. Les cellules avec des dispersions très grandes ou élevées sont généralement de grandes cellules; cependant, ils peuvent être grands simplement parce qu'ils contiennent une proportion élevée de cytoplasme, ou ils peuvent être élevés parce qu'ils ont un très gros noyau. Selon la biologie étudiée, cela variera bien sûr considérablement d'une expérience à l'autre.
Regardez les chiffres. Ajustez les tracés pour afficher différents paramètres sur un axe (généralement l'axe X) tout en gardant les comptes sur l'axe Y. Cela indique la proportion de la population de l'échantillon qui est positive pour ce paramètre particulier, en tant que le pic sera normalement observé dans un échantillon coloré positivement, qui sera absent du contrôle négatif goûter.
Regardez les histogrammes à plusieurs paramètres. En ajustant l'axe X et l'axe Y pour que chacun représente un paramètre différent qui a été étudiées au cours de l'expérience, il est possible de mieux comprendre les propriétés de l'échantillon. Par exemple, en réglant l'axe X sur la fluorescence rouge et l'axe Y sur la fluorescence verte, des portes de style quadrant peuvent être calculées pour le échantillon pour montrer quatre régions d'un quadrant dans lesquelles des cellules sont présentes et colorées pour la fluorescence rouge ou verte, les deux couleurs, ou aucune à tout. Cela permet à un échantillon hétérogène d'être divisé en ses composants et à toutes les entités qui se chevauchent d'être visualisées ainsi que quantifiées.
Les références
- « Analyse des données de cytométrie en flux »; Susan Sharrow; 1991
- « Cytométrie en flux: instrumentation et analyse de données »; Marvin Van Dila; 1985
- « Protocoles de cytométrie en flux »; Teresa et Robert Hawley; 2004
A propos de l'auteur
Palmer Owyoung est titulaire d'une maîtrise ès arts en commerce international de l'Université de Californie à San Diego et d'un Baccalauréat ès arts en sociologie de l'Université de Californie à Santa Barbara et est un moléculaire formé biologiste. Il est écrivain indépendant depuis 2006. En plus d'écrire, il est un trader Forex et un spécialiste du marketing Internet à temps plein.
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