Le bouillon nutritif liquide est utilisé pour cultiver des bactéries telles que Escherichia coli. Les recettes de ce bouillon varient en fonction de l'espèce bactérienne et de la présence de modifications génétiques, par exemple la résistance aux antibiotiques. Le bouillon peut être solidifié en ajoutant de la gélose, ce qui permet aux bactéries de former des colonies distinctes, alors qu'en culture liquide elles se dispersent simplement dans tout le volume. Il s'agit d'une technique basique mais essentielle pour les méthodes avancées telles que le clonage de gènes ou les tests microbiologiques. Cet article suppose que les souches d'Escherichia coli de laboratoire standard doivent être cultivées sur des plaques de gélose au bouillon Luria (LB) (ou des boîtes de Pétri).
Pesez 10 grammes de tryptone de qualité bactérienne, 5 grammes d'extrait de levure, 5 grammes de chlorure de sodium, 15 grammes d'agar ou d'agarose et 1 millilitre d'hydroxyde de sodium 1N. Mélanger ceux-ci avec un volume d'eau stérile distillée et autoclavée jusqu'à obtention de 1 litre de milieu. Autoclaver le milieu dans des bouteilles ou des flacons à bouchon lâche pendant 25 minutes. Laisser refroidir à environ 50 degrés Celsius avant d'ajouter des réactifs qui seront détruits à haute température, comme des antibiotiques ou d'autres compléments nutritionnels.
Laissez le milieu autoclavé refroidir à 50 degrés Celsius et pas moins de 45 degrés Celsius, car la gélose se fixera dans son récipient avant de pouvoir être versée. Procurez-vous des boîtes de Pétri stériles et versez suffisamment pour couvrir toute la surface de la plaque et au moins la moitié de sa profondeur. Évitez de trop remplir les plaques et de préférence ne laissez pas la gélose entrer en contact avec le bord supérieur du plat. Laisser les plaques se solidifier dans un environnement stérile (par exemple sous une hotte à flux laminaire) en laissant les couvercles fermés et dans un coin de la hotte.
Séchez les plaques. Bien que les plaques puissent être utilisées dès qu'elles sont durcies, une certaine humidité sera présente à la surface de la gélose, ce qui empêchera les colonies bactériennes d'adhérer suffisamment. Par conséquent, il est préférable de sécher les plaques avant d'appliquer des bactéries, par exemple en les laissant reposer à température ambiante pendant quelques jours ou pendant une demi-heure sous une hotte à flux laminaire ou à 37 degrés Celsius incubateur.
Rangez les assiettes. Les assiettes séchées doivent être empilées à l'envers (inversées) sur leurs couvercles et remises dans leur état d'origine emballage fermé avec du ruban adhésif et soit enveloppé dans du papier d'aluminium pour protéger de la lumière, soit dans un récipient. Inscrire toujours la date de préparation sur les plaques et éviter d'utiliser si les plaques ont plus de 2 mois.
Les références
- « Protocoles actuels en biologie moléculaire »; Karen Elbing et Roger Brent; 2002
Conseils
- Effectuez autant d'étapes ci-dessus (de préférence toutes) que possible dans un environnement stérile (par exemple, sous un flamme nue ou hotte à flux laminaire) pour empêcher les contaminants bactériens en suspension dans l'air d'entrer et de se développer dans le médias.
A propos de l'auteur
Palmer Owyoung est titulaire d'une maîtrise ès arts en commerce international de l'Université de Californie à San Diego et d'un Baccalauréat ès arts en sociologie de l'Université de Californie à Santa Barbara et est un moléculaire formé biologiste. Il est écrivain indépendant depuis 2006. En plus d'écrire, il est un trader Forex et un spécialiste du marketing Internet à temps plein.
Crédits photos
Jupiterimages/Comstock/Getty Images