Le clonage TA est une méthode simple et pratique de sous-clonage de produits de réaction en chaîne par polymérase (PCR). "TA" est l'abréviation de "thymine" et "adénine". Cette technique de clonage utilise la capacité de la thymine à s'hybrider à l'adénine en présence de ligases. Les enzymes de restriction ne sont pas utilisées, contrairement à la méthode traditionnelle de sous-clonage. Au lieu de cela, les produits de PCR sont amplifiés à l'aide d'enzymes polymérases Taq.
Méthode
La méthode de clonage TA utilise l'activité transférase terminale de certains acides désoxyribonucléiques en surplomb à chaque extrémité du produit PCR.
Un vecteur de clonage linéarisé avec un seul, trois surplombs prime-T (3'-T) appelé vecteur T est utilisé pour cloner ce produit PCR dans un vecteur plasmidique. Le produit PCR est mélangé à ce vecteur en forte proportion.
De l'ADN ligase (ligase T4) est ajoutée au mélange, ce qui permet aux deux produits de s'hybrider et de se joindre.
Avantages et inconvénients
Le clonage TA est une méthode pratique de sous-clonage de produits PCR dans le vecteur linéarisé, et il est beaucoup plus simple et rapide que les méthodes de sous-clonage traditionnelles. Comme cette méthode n'utilise pas d'enzymes de restriction, les produits sans sites d'enzymes de restriction peuvent être clonés.
Un inconvénient est que les kits de clonage TA sont très chers et, par conséquent, leur utilisation est limitée. De plus, il n'y a pas de clonage directionnel; la probabilité de clonage dans une direction opposée est donc plus grande.
Kits de clonage TA
Plusieurs fabricants vendent des kits de clonage TA. Certains sont Invitrogen, QIAGEN et Premier Biosoft.