Les scientifiques et les chercheurs étudient la croissance bactérienne en préparant des cultures en laboratoire. Les boîtes de Pétri contenant de la gélose nutritive font pousser des cultures bactériennes à partir d'un seul passage ou d'une inoculation. Les élèves peuvent préparer de la gélose nutritive à la maison en utilisant des fournitures provenant d'épiceries ou de magasins d'aliments naturels pour un projet d'expo-sciences. Les appareils de cuisine conventionnels et les ustensiles de cuisine de base fournissent les outils nécessaires pour préparer un milieu de culture stérile pouvant être distribué dans des boîtes de Pétri. Suivre des techniques stériles en chauffant les matériaux et en gardant les surfaces propres et sèches améliorera les résultats en empêchant les moisissures et les particules de contaminer la culture.
Placez un filtre à café dans une passoire et suspendez la passoire sur l'ouverture du bol transparent.
Versez lentement le bouillon dans le filtre, en vous assurant que le bouillon ne déborde pas des côtés du filtre. Si le filtre est obstrué par des particules, retirez le filtre usagé, remplacez-le par un filtre propre et continuez à verser le bouillon.
Retirez la passoire et le filtre du haut du bol et observez si le bouillon semble clair (c'est-à-dire qu'il n'y a pas de particules en suspension dans le liquide). Si des particules flottent dans le liquide, répétez les étapes 1 et 2 en utilisant un deuxième bol transparent et un filtre à café frais.
Placez le pot sur la cuisinière et versez le bouillon clair dans le pot.
Ajouter 16 onces d'eau distillée dans la casserole contenant le bouillon.
Allumez la cuisinière et réglez le feu à moyen-doux. Chauffer le bouillon à ébullition (c'est-à-dire que de petites bulles apparaissent près du côté de la casserole).
Ajoutez 1 cuillère à café de poudre d'agar-agar au bouillon frémissant (environ 2,5 grammes) et remuez le mélange jusqu'à ce que la poudre soit dissoute. Assurez-vous de remuer la poudre pour la dissoudre et empêcher la gélatine de couler au fond du pot (où elle peut brûler).
Répétez l'étape 7 jusqu'à ce que toute la poudre d'agar-agar soit dissoute dans le bouillon.
Continuez à remuer le bouillon pendant environ 1 minute pour vous assurer que toute la poudre est complètement dissoute.
Éteignez le feu, placez le couvercle sur la casserole et laissez le liquide refroidir pendant au moins 15 minutes.
Disposez les boîtes de Pétri stériles dans une rangée pour un assemblage facile, mais ne retirez pas les couvercles. Si vous le souhaitez, placez un dessous de plat pour tenir le pot chaud. Si vous utilisez des pots à crème pâtissière à couvercle au lieu de boîtes de Pétri, stérilisez les pots à crème anglaise en plaçant les pots et les couvercles inversé (à l'envers) sur une plaque à biscuits recouverte de papier d'aluminium et cuire au four pendant au moins une heure à 375 degrés Fahrenheit. Assurez-vous que les tasses et les couvercles stérilisés sont complètement refroidis avant utilisation.
Touchez soigneusement l'extérieur du pot pour vérifier qu'il est chaud au toucher et placez le pot sur le dessous de plat. Si le pot est trop chaud au toucher, attendez au moins 10 minutes pour laisser le pot refroidir.
Retirez le couvercle et mettez de côté. Placez la louche dans la marmite.
Retirez le couvercle d'une boîte de Pétri et versez du bouillon nutritif pour remplir la boîte à moitié. Couvrir immédiatement le plat avec son couvercle.
Répétez l'étape 14 pour chacune des boîtes de Pétri.
Laisser le bouillon nutritif se solidifier dans les boîtes de Pétri pendant au moins 1 heure, sans être dérangé.
Secouez doucement les boîtes de Pétri d'un côté à l'autre pour vérifier que le bouillon nutritif s'est complètement solidifié. Si le bouillon n'est pas complètement gélifié, attendez encore 20 minutes avant de vérifier à nouveau.
Couvrez une table ou une surface plane avec un rouleau d'essuie-tout pour créer une zone de travail stérile. Déchirez une feuille d'essuie-tout et pliez-la quatre fois pour créer une épaisse liasse rectangulaire. Placez ce tampon à une extrémité de la zone de travail.
Transférer une boîte de Pétri dans la zone de travail stérile et retirer le couvercle. Retournez délicatement le plat et placez une extrémité sur le côté du tampon plié, de manière à ce qu'il soit à l'envers et légèrement incliné (avec un léger écart par le tampon essuie-tout).
Retournez le couvercle et placez-le au-dessus de la boîte de Pétri sur la surface de travail stérile. Si des gouttelettes d'eau apparaissent sur le couvercle, secouez doucement cette humidité avant de placer sur la surface couverte, mais ne touchez pas l'intérieur du couvercle.
Répétez les étapes 19 et 20 pour chaque boîte de Pétri, en positionnant un côté de la boîte inversée sur le côté de la boîte précédente plutôt que sur le papier essuie-tout. La vaisselle apparaîtra comme un ensemble décalé, avec des espaces d'un côté pour que l'excès d'humidité puisse s'évaporer.
Regardez les boîtes de Pétri inversées pour vérifier si l'humidité sur les côtés des plaques s'est évaporée. Une fois que toute l'humidité s'est dissipée, retournez les plaques à l'endroit et couvrez immédiatement avec les couvercles pour l'utilisation.
Inoculer la gélose nutritive sur la plaque en essuyant un coton-tige contenant la culture souhaitée sur la surface de la gélose nutritive avant de couvrir avec le couvercle. Retournez la boîte de Pétri pour que le solide soit dessus. Conservez la boîte de Pétri inoculée avec le solide sur le dessus pour la culture et le couvercle sur le fond pour récupérer l'humidité, les particules libres ou la croissance.
Choses dont vous aurez besoin
- Filtres à café
- Passoire
- 2 grands bols transparents
- 16 onces. bouillon de boeuf sans gras
- 16 onces. eau distillée
- Marmite avec couvercle
- Le fourneau
- 10 grammes d'agar agar
- Cuillère doseuse
- Agitateur
- Rouleau de serviettes en papier
- Maniques
- Louche en métal
- Boîtes de Pétri stériles ou coupes à crème pâtissière transparentes avec couvercles
- Facultatif: minuterie, dessous de plat, four, casserole, papier d'aluminium, casserole
Conseils
Si une humidité excessive apparaît sur les couvercles, séchez et stérilisez les couvercles dans le four réglé à 375 degrés Fahrenheit pendant au moins 1 heure (assurez-vous de placer les couvercles dans une casserole propre recouverte de papier d'aluminium avant de les mettre dans le four).
Mises en garde
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Soyez prudent lorsque vous manipulez le pot chaud pour éviter les brûlures. Si le côté du pot est trop chaud, le liquide dans le pot est très chaud. Le bouillon nutritif doit être chaud pour être distribué dans les boîtes, mais pas trop chaud pour produire une condensation excessive dans les boîtes de Pétri pendant le refroidissement et la prise.
Ne touchez pas l'intérieur de la boîte de Pétri (c'est-à-dire la plaque ou le couvercle) pour éviter d'introduire des bactéries indésirables dans la culture.