L'électrophorèse sur gel est l'une des principales méthodes utilisées en biologie moléculaire pour l'analyse de l'ADN. Cette méthode implique la migration de fragments d'ADN à travers un gel, où ils sont séparés sur la base de la taille ou de la forme. Cependant, même une méthode scientifiquement solide telle que l'électrophorèse sur gel n'est pas à l'abri d'erreurs.
Comment fonctionne l'électrophorèse
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L'électrophorèse sur gel implique l'utilisation d'un gel généralement constitué de polymères tels que l'agarose. Le gel est immergé dans une solution tampon qui conduit un champ électrique. L'échantillon d'ADN d'intérêt est d'abord fragmenté à l'aide d'enzymes de restriction puis injecté dans le gel. Lorsque le champ électrique est activé, les fragments d'ADN dans le gel migrent vers l'électrode positive. Si les fragments d'ADN sont de tailles différentes, alors les temps de migration seront différents pour chaque fragment de taille. Les fragments sont ensuite visualisés à l'aide d'un colorant ou d'une autoradiographie et sont visibles sous forme de bandes dans le gel.
Contamination de l'échantillon
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La principale application de l'électrophorèse est un outil pour l'analyse de l'ADN en biologie moléculaire, mais elle est également utilisée en médecine légale comme moyen d'identifier des échantillons provenant d'une scène de crime. Il est important que les sources d'erreurs dans cette technique soient minimisées afin d'obtenir des résultats précis. Une source d'erreur est la contamination de l'échantillon d'ADN. S'il y a de l'ADN étranger dans l'échantillon, le gel aura plus de bandes que dans un gel qui ne contient que l'échantillon purifié.
Problèmes avec le gel, le courant et le tampon
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La concentration du gel doit également être correcte pour éviter les erreurs. Si la concentration est trop élevée ou trop faible, les fragments migreront soit trop lentement, soit trop rapidement. Cela conduira à des erreurs dans la résolution des différentes bandes. Pendant l'exécution de l'électrophorèse, il faut veiller à ce que la tension soit constante. Toute fluctuation de la tension entraînera une migration instable des fragments d'ADN, entraînant des erreurs de lecture des bandes. La solution tampon doit également être de la composition correcte, car un tampon avec un pH ou une concentration ionique incorrects modifiera la forme des fragments d'ADN, modifiant également leurs temps de migration.
Visualisation correcte
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Plus important encore, le gel doit être visualisé correctement. Si la concentration du colorant ou de la sonde radioactive utilisée pour visualiser les échantillons est trop élevée, l'image résultante sera très brouillonne, car des fragments résiduels seront également visualisés. Si la concentration de gel est trop faible, il n'y aura pas de visualisation. Lorsque les processus corrects ont été suivis à toutes les étapes, l'électrophorèse sur gel donnera des résultats précis et pouvant être utilisés en toute confiance. Comme pour toutes les procédures scientifiques, l'électrophorèse sur gel peut être sujette à des erreurs, mais celles-ci peuvent être minimisées avec une préparation et une manipulation appropriées.